蛋白从头测序的样本处理
从头测序是一种不依赖于已知蛋白序列数据库的序列分析方法,它利用质谱检测到的两个片段离子之间的质量差来计算肽链上氨基酸残基的质量,进而推断多肽或蛋白的氨基酸序列。对于一个没有相应理论数据库、或者新发现的蛋白/多肽来说,从头测序就显得十分重要。
进行蛋白质分析首先要制备合适的蛋白样品。制备从头测序的蛋白样本应从其含量、纯度、保存以及运输等方面进行考虑:(1)可以制备液体或冻干粉样品,保证样品含量在20 -100 ug左右,最好不要低于20ug;(2)蛋白纯度应尽可能高,如果是液体样品,应保证缓冲液中不含高盐和SDS等去垢剂;(3)制备好的样品可于室温或4℃密封无菌保存;(4)运输过程中应注意液体样品通过干冰运输或进行真空/冷冻抽干后冰袋运输,固体样本可直接使用冰袋运输。