lgA 肾病动物模型【北京动物造模】

lgA 肾病动物模型【北京动物造模】

【造模机制】联合应用牛血清白蛋白、脂多糖和四氟化碳造成动物胃肠道黏膜免疫功能紊乱和免疫系统对血液和肾小球中的多量 IRA清除障碍,致使肾小球系膜这以 IgA 为主的免疫复合物沉积,同时使系膜细胞增生,基质增多,继续发展动物可出现尿蛋白和尿血等lgA 肾病时典型症状。

【选模方法】

1.动物及分组选用清洁级雄性 SD 健康大鼠,体重为 220~260g,随机分组。

2.模型制备采用复合改良法造模:运用牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)十脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)+四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl.)方法建立实验性 IgA 肾病模型,方案如下:口服免疫原 BSA 剂量较常用剂量增加 1倍,400mg/kg 隔天灌胃,持续 6 周;CCL 注射方式由既往的腹腔注射改为皮下注射,用诱导肝纤维化剂量的 1/3(皮下注射蓖麻油 0.5ml+CCL 0.10ml,每周 1 次,持续」周).并联合运用 LPS(分别于第6.8 周以 LPS 0.05mg 尾静脉注射)。正常对照组正常饮食和生活,不予干预。

3.样本收集和指标测定用代谢笼收集 24 小时尿,每3 周检测 1 次 24 小时尿蛋白和尿常规,直至第 10 周末。在造模的 10 周内,每天观察有无肉眼血尿。分别于实验开始第 1天、造模后第 10 周末从大鼠静脉取血,用全自动生化分析仪检测 ALT 和 AST、血清白蛋白、血清总蛋白、尿素氮及血肌酐。实验结束取肾脏分成两半,外围的肾皮质一部分冷冻切片.做免疫荧光 1gA 检测;另一部分做常规光镜检查。取高碘酸-希夫染色(PAS)的肾组织切片置于 200 倍光学显微镜下,每个标本随机计数 15 个肾小球,利用德国 KONTR(NIBAS2.5 全自动图像分析系统,用鼠标标出肾小球系膜区,计算面积,同时测出毛细血管丛面积,算出肾小球系膜区占整个毛细血管丛面积的百分比。采用国内外通用的半定量标准对肾组织进行免疫荧光强度分级。

【模型特点】采用复合改良法造模,全部大鼠均出现蛋白尿,其中 70%出现肉眼血尿,30%出现镜下血尿,免疫荧光显示肾组织 IgA 强度(2t≤3*),光镜 PAS 染色显示有弥漫性的轻中度系膜区增生,血白蛋白(ALB)水平较正常对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),转氨酶较正常对照组没有升高。复合改良法造模的优点：

1.联合应用 LPS+RSA+CCL作为造模方法 LPS 是免疫佐剂,毒性较外毒素葡萄球菌肠毒素弱,不易对动物机体造成损害,引起动物死亡。

2.将口服免疫原 BSA 的剂量比既往加大 1 倍改为 400mg/kg,隔日1次。

3.CCL 由以往的腹腔注射改为皮下注射且剂量减少至诱导肝纤维化剂量的 1/3.尽可能减少对肝脏的损害,CCL常规诱导肝纤维化的剂量为 50%(体积比)。通过以上改良,模型组 IgA 在肾脏组织有较强沉积,操作起来更方便和安全,不易引起腹腔感染和动物死亡,并且无明显肝脏损害。在整个实验过程中,改良造模组大鼠无 1 例死亡,除了临床检测指标(蛋白尿,血尿)取得比较满意的结果外,病理方面也较为理想,全部造模大鼠肾脏系膜区都出现以较强的 IgA 沉积为主的病变。

【应用范围】研究 IgA 肾病的发病机制和治疗方法。

【注意事项】

1.应严格按 LPS+BSA+CCI组合方法、给药剂量,方法造模。

2. CCI,剂量不能增大,不然会造成肝脏功能严重损害,降低造模成功率。

【模型评估】IgA 肾病是最常见的原发性肾小球疾病,约占原发性肾小球疾病的 1/3。采用复合改良法造模,是目前 IgA 肾病中较为可靠、稳定、成功率高,且病理、临床指标接近人类 IgA 肾病的动物模型。它克服了口服免疫源十肝脏切除十免疫佐剂复合造模法动物死亡率高(约50%)的缺点;葡萄球菌肠毒素十口服免疫源十免疫佐剂复合造模法因葡萄球菌肠毒素是外毒素,毒性大,易引起机体损害;腹腔注射 CCI,引发的 IgA 肾病模型,虽然有高强度的 IgA 沉积,但肝脏功能损害严重,常伴有肝细胞坏死、变性和假小叶生成。但啮齿类动物复制的 IgA 肾病模型,其血清 IgA 特性与人类存在较大差别,有望建立基因工程模型来克服其不足,因此,建立更新、更方便、更贴近人类特点的 IgA 肾病动物模型仍是我们共同的研究任务。

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