为什么需要进行活细胞标记？

一、活细胞标记：

细胞功能和发病机制的许多关键研究成果都依赖于标记活细胞。为了研究个体细胞行为、生长和分化以及细胞间的相互作用，能够永久地“标记”细胞群而不影响其形态或功能是至关重要的。对细胞现象的研究，例如粘附、结合物形成、细胞毒性、吞噬作用、生长促进、存活时间、细胞凋亡和杂交瘤融合等，都依赖于可靠、无毒、稳定的细胞标记。

用于标记细胞的早期方法使用荧光标记（例如荧光素、罗丹明、Dil-C18-(3)或Hoechst染料）或者放射性标记（例如125I-碘苷、111In-铟喔星和51Cr-铬酸钠）。这些方法在它们各自的时代都发挥了很好的作用，但也都有各自的局限性和缺点。有些方法不够稳定，因此它们会泄漏并转移到混合群体中的其他细胞，这会产生混淆的结果。有些方法则改变细胞功能或具有细胞毒性，因此导致与其使用直接相关的实验伪影。最后，这些方法所实现的标记通常弱或不均匀，使得检测困难并且不可能设计可靠的标记方案。

01 推荐：PKH荧光细胞连接子染料

PKH染料以其发现者Paul Karl Horan的名字命名，是获得专利的荧光染料和细胞标记技术，已成功用于动物、植物和细菌细胞，甚至可以染色含有非细胞膜的颗粒。标记的细胞可通过培养以及在体内进行研究。快速分裂的细胞（例如杂交瘤）以及非增殖细胞（例如红细胞）亦可被标记和跟踪。

有三种不同的PKH染料可用于标记细胞—PKH2、PKH26和PKH67。PKH2和PKH67是绿色荧光标记，两者均可用显微镜和配有荧光素过滤器的流式细胞仪检测。由于它们的发射光谱与红色区域几乎没有重叠，因此它们非常适用于细胞毒性研究，与红色荧光活力探针如碘化丙啶（PI）和7-氨基放线菌素D（7-AAD）以及其他红色标记如R-藻红素和德克萨斯红结合使用。它们也非常适合植物研究，因为它们避免了红色区域叶绿素自发荧光的干扰。

PKH2的体内半衰期为5-8天，因此非常适合中短期研究。PKH67具有比PKH2更长的脂肪族尾部，产生更稳定的标记和更少的细胞间转移。其体内半衰期为10-12天。PKH2的先前使用者可能会发现，在中长期研究中以及在必须最小化细胞间转移的研究中，PKH67能产生更好的结果。

PKH26是一种红色荧光染料。它具有最长的体内半衰期—超过100天—这使其特别适用于体内细胞跟踪、细胞增殖研究和其他长期测定。 罗丹明或藻红蛋白（PE）过滤器适用于PKH26检测。可以使用标准荧光素激发波长，但荧光强度会稍微降低。

PKH26与绿色PKH染料互补。在混合细胞群的研究中，它可以在不受PKH2、PKH67或荧光标记抗体干扰的情况下定量。

PHK荧光细胞染料的优势：

• 可对活细胞进行稳定、均匀、强烈和可再现的荧光标记

• 稳定标记长达100天

• 无细胞毒性，对生物活性或增殖活性无影响

• 染色强烈且易于使用

• 多功能 — 适用于任何细胞类型

• 从细胞到细胞的泄漏或转移最小

02 适合标记的细胞类型

1. 造血细胞：CD34+干细胞，正常祖细胞和肿瘤细胞，培养起始细胞

2. 非造血祖细胞

3. 免疫细胞：淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、胸腺细胞、脾细胞、细胞毒性或自身免疫性效应细胞、树突状细胞

4. 其他血液或骨髓细胞：红细胞，中性粒细胞，血小板，基质细胞，肺纤维细胞

5. 培养或转染的细胞或细胞系：肿瘤细胞和细胞系，成纤维细胞，平滑肌细胞，杂交瘤，t细胞系

6. 其他原代细胞：鸡生殖细胞、胚胎细胞、成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、白血病母细胞、肥大细胞、间充质细胞、成肌细胞、神经元和神经元前体、平滑肌细胞

7. 细菌，寄生虫：枯草芽孢杆菌、杜氏利士曼原虫、单核李斯特菌、鸡疟原虫、鼠伤寒沙门氏菌、曼氏血吸虫、艾滋病病毒、旋毛虫、霍乱弧菌

8. 其他生物：病毒、原生质体、浮游植物、红细胞幽灵、氟碳乳剂、吞噬体

来源：“ 细胞之邦”公众号
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