不同种类的PCR探针如何工作-Amplifluor®

在 Amplifluor® 测定中，PCR 探针与目标序列杂交，标记的探针改变其构象以发出荧光。 它包含三个组件：Z 序列、Z 引物和 UniPrimer。

Z序列：用作模板的18个核苷酸的序列。

Z 引物：结合 Z 序列 5' 端的序列。

UniPrimer：以环状形式存在的序列，其中荧光报告基因和猝灭剂非常接近。

图 1. Amplifluor® 检测由 Z 引物和 Z 序列以及包含淬灭剂和报告基因的 UniPrimer 组成。

Amplifluor® 检测如何工作？

在 Amplifluor® 测定中，Z 序列与 Z 引物的 5' 端结合。

Z 引物在第一个扩增循环中与目标序列杂交并延伸。

这个 Z 序列是 UniPrimer 的 3'端。 在第二个扩增循环中，该 Z 序列与第一个序列的产物杂交。 它用作 UniPrimer 的模板，UniPrimer 包含与 Z 序列互补的序列。

在第三个扩增循环中，扩展的 UniPrimer 充当下一个扩增循环的模板链。

在第四个循环中，UniPrimer 的打开导致淬灭剂和荧光报告分子分离，然后报告分子发出荧光。

此处，荧光信号与扩增产物的量成正比。

图 2. 显示了 Ampliflour® 分析在每个循环中的过程。

该探针的优点是对目标序列具有特异性。 缺点是寡核苷酸序列的设计复杂。