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CRISPR KO Total Solution | 如何快速定位适合您的guide RNA?

2023-06-26 09:08 作者:分子科普小feng子  | 我要投稿

增强基因敲除信心

Dharmacon Edit-R CRISPR系列guide RNA是经验证的算法设计的,可实现高特异性的功能基因敲除,因此您可以对敲除结果充满信心。

适应多种工作流程的灵活性

A. DNA-free体系:合成sgRNA或crRNA: tracrRNA,搭配Cas9蛋白或mRNA

B. Lentiviral sgRNA:慢病毒质粒载体形式,更适合无法化转/电转的难转染细胞

C. Lentiviral All-in-one sgRNA: 单个试剂即可完成基因敲除

如何选择合适的gRNA?

根据您的实验应用及细胞类型,选择合适的gRNA,可参考下表:

*仅用于S. pyogenes Cas9的定制载体设计
**需搭配荧光Cas9 mRNA共转染

为什么更推荐DNA-free体系?

1. DNA-free体系定义: CRISPR-Cas9体系中不含任何DNA载体形式组分,可通过化学转染、显微注射或电转进行编辑

1)全RNA体系:sgRNA+Cas9 mRNA; crRNA: tracrRNA+Cas9 mRNA

2)RNP体系:sgRNA+Cas9 蛋白; crRNA: tracrRNA+Cas9 蛋白

2. DNA-free体系优势:

编辑效率更高:特殊设计算法、Dharmacon专利2’-ACE化学修饰[1]保证更高的编辑效率。

(2)脱靶效应更低:Dharmacon CRISPR特异性分析工具不仅可以识别多个错配,还能够识别RNA和DNA序列间隙进行脱靶认证,最终投放效果最好的sgRNA/crRNA到产品中,

有效降低脱靶效应[2]。

(3)安全性更高:瞬时表达、无DNA整合风险、无启动子兼容问题。


(4)简便性更强:即买即用,无需构建质粒载体和病毒级实验环境,一步转染,显著缩短实验周期。



(5)支持多靶点编辑:可通过转染多条sgRNA/crRNA对细胞多个靶点进行编辑,无需构建多靶点载体。

(6)支持CRISPR快速筛选:阵列形式sgRNA/crRNA文库,是大规模文库筛选的理想选择。

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优宁维分子生物学


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