Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7荧光标记抗体/蛋白试剂盒的制备与研究

荧光标记蛋白质是与荧光染料共价结合的蛋白质分子。荧光标记通常作为研究构象动力学和分子相互作用的工具，或跟踪蛋白质的运动，以了解其生物学功能。荧光分析可以实时在溶液中进行，具有高的时间分辨率，灵敏度可达到单分子级别。下面和瑞禧生物小编一起来看Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7荧光标记抗体/蛋白试剂盒（10~100mg标记量）的概述与实验步骤。

荧光标记抗体/蛋白试剂盒

Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7偶联试剂盒可以通过抗体/蛋白上的伯胺基团（如赖氨酸），简单、快速地实现抗体/蛋白与Cy5/Cy5.5/Cy7的共价偶联。

此为通用型试剂盒，适合各种分子量不一致的抗体/蛋白偶联Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7。偶联在30分钟内即可完成，偶联效率可达70%左右。使用超滤管纯化，可快速去除多余Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7，且不会损失抗体/蛋白。

试剂盒组成与存储

收到后将Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix(含10%Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7染料)储存在-20⁰C，Coupling Reagent、溶解液可在+4°C短期保存或-20°C长期保存。

实验步骤

1.取待标记抗体/蛋白(1~10mg)，溶解于1mL纯水中，加入100μLCoupling Reagent，混合均匀待用。

注：抗体/蛋白在1~10mg内均用1mL纯水溶解，并加入100μLCoupling Reagent。超出此范围，请按比例增减，如0.5mg抗体/蛋白，建议使用0.5mL纯水溶解并加入50μLCoupling Reagent。

(以下步骤按标记1mg抗体/蛋白为例)

2.根据荧光标记需求程度，称取0.1~1mgCy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix固体加至第1步溶液，充分混合溶解。

注：(a)若Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix用量超出1mg，可能导致荧光标记过量，引起荧光部分淬灭;

(b)若低于1mg的Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix难以称取，可先取1mg Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix固体溶解于100μLCy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix溶解液，再按需取Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix溶液加至第1步溶液。由于Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix溶解后易分解，溶液须尽快使用且不可保存。

3.室温避光反应30min，延长反应时间不影响偶联效率。

4.将反应液转移至超滤管，10000rpm超滤5min，即可除去未反应的Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix，为提高纯度，可加入纯水重悬抗体/蛋白，重复超滤1~2次。

5.使用纯水或PBS将超滤管截留下的抗体/蛋白重悬，即得到Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7荧光标记的抗体/蛋白溶液。

注意事项

1.偶联前抗体/蛋白中可能含有成分，建议低于以下比例:

注：若以上干扰组分超出建议比例，可先通过超滤管或透析等方式除去干扰成分，再使用本试剂盒进行抗体/蛋白荧光标记。

2.偶联后的抗体/蛋白应避光保存。通常在4℃下可保存6~12个月。如需保存更长时间，可加入冷冻保护剂如50%甘油，在-20℃保存。

RXYWX.2022.7.29