Anal Chem|结合质谱与PB反应在单细胞水平上确定脂质双键位置
大家好，今天跟大家分享一篇在Anal Chem上发表的文章，论文的题目为“Combining Mass Spectrometry with Paternò-Büchi Reaction toDetermine Double-bond Positions in Lipids at the Single-cell Level”。论文的通讯作者为俄克拉荷马大学的Yang Zhibo助理教授。Yang教授的主要研究方向为单细胞质谱分析及质谱成像。
众所周知，细胞是生命体的最小结构单元。现有的研究大多是针对于群体细胞进行研究。而由于细胞群体中每个细胞遗传及表型的异质性，单细胞水平的相关研究越来越成为研究的热点。作为细胞的重要组成物质之一，脂质在细胞代谢和信号转导中发挥重要的作用。含有一个或多个C=C双键的不饱和脂肪酸是脂质的一个亚类。鉴定不饱和脂肪酸中双键的位置对于脂质化学来说是非常重要的。已经有大量的研究用于不饱和脂肪酸双键位置确证的研究，例如Paternò–Büchi (PB)反应。然而，由于单个细胞中分析物的量非常小(少量pLs)和缺乏适当的技术，在单细胞水平上的相应研究仍未被探索。
本文设计了一种玻璃微管针，具有单细胞的取样、裂解、PB微反应及离子源喷针多种功能，并结合质谱实现了对单个细胞中不饱和脂质中个C=C双键位置测定，实验装置如图1所示。
首先，有机溶剂浓度对细胞裂解有很大影响，因此需要对抽样溶剂进行了考量，选择丙酮和二苯酮作为细胞裂解和PB反应的溶液。丙酮和二苯酮作为PB反应试剂时的机制如图2所示。此外，作者还对玻璃微管针进行了表征并编写了Python对于得到的数据进行分析。
其次，作者将优化好的方法用于单个细胞中不饱和脂质的双键位置的鉴定，对得到的完整数据进行分析后初步鉴定到16个不饱和脂质，结果如表1所示。由于二苯酮会影响脂质检测的灵敏度，因此作者丙酮是更有效的PB反应试剂。
