GPC测试样品（一）

在做GPC测试时，科学指南针检测平台工作人员在与很多同学沟通中了解到，好多同学对GPC测试不太了解，针对此，科学指南针检测平台团队组织相关同事对网上海量知识进行整理，希望可以帮助到科研圈的伙伴们；

 

测试样品要求

（1）样品尽量纯，而且必须可溶于GPC流动相。

（2）为了增加样品的溶解，可轻微扰动（不要剧烈摇动或用超声）

 

GPC柱选择

 

对于GPC而言，选择合适的色谱柱是成功分离的核心。从溶剂类型分，主要包括有机相色谱柱，水相色谱柱和蛋白质色谱柱。

 

最常用的有机相色谱柱常用的填料基质是苯乙烯和二乙烯苯的共聚物，一般以悬浮聚合或分散聚合方式制成苯乙烯-乙烯基苯多孔微球，以致孔剂制出所需孔径和孔容。这类凝胶的特点是孔径分布比较宽，分子量分离范围比较大，且柱效高。主要用于非极性有机溶剂，丙酮、乙醇一类极性溶剂不能应用。在有机溶剂中，有机凝胶通常都处于溶胀状态对不同的溶剂溶胀因子各不相同，因此不能在柱中直接更换溶剂，进样时也不能带进大量不良溶剂和空气。

 

蛋白质的填料柱主要分为两种，氧化硅和纤维素凝胶。氧化硅基质填料的有点是硬度较高，分辨率较高，耐压性较号，可以使用较高流速。纤维素凝胶填料的优点是用途广泛，甚者可以同时分离蛋白和某些高分子的混合物，如PEG和蛋白，但是硬度较低，流出物较多，建议在低流速下使用。

 

流动相选择

 

做GPC检测时首先要考虑被测样品的溶解情况，以此确定流动相，还要考虑柱子的测试范围，应使被测物分子量落在柱子的分子量-淋出曲线线性部分之内，若柱子范围太窄则可考虑将不同规格的柱子串联使用。

 

对于适用于GPC仪器的每一根柱子都会配有详细的使用说明，使用之前应认真阅读，严格遵从，特别值得注意的是严禁超压（超流量），否则会降低柱效、损毁柱子。如Shim-pack GPC-800系列柱，对于填充溶剂为THF型或者氯仿型能使用其他的洗提液如甲苯、亚甲基氯化物替换，而对填充溶剂为DMF型的GPC柱，流动相不能被其他洗提液替代。

 

通常流动相溶剂类型的改变应当在流速不超过0.5 mL/min时候进行，且对于同一根柱最好只使用单一类型的溶剂，频繁的改变流动相类型会缩短柱的寿命，而GPC仪器柱的价格昂贵，通常上万元一根。流动相溶剂最好是色谱级，否则需用孔径为0.2~0.45μm的膜过滤。

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