腺相关病毒滴度测定

qPCR是一种简单的、高通量的测定纯化病毒样本中腺相关病毒颗粒数的方法。每个模板的Ct值与该模板起始拷贝数的对数存在线性关系，利用已知拷贝数的标准品制作标准曲线，通过标准曲线对未知模板进行定量分析。

1.去除游离的DNA分子

将病毒原液稀释10倍，以保证样品中的DNA充分溶解，按照下述体系在37℃孵育30min，去除游离的DNA分子，之后95℃加热5min，使DNA酶失活。

 组成成分                                                       体积

超纯水（DNase & RNase Free）             4μl

DNA酶                                                           1μl

10×DNA酶 Buffer                                         1μl

病毒稀释液                                                     4μl

Total                                                                10μl

2.去除病毒外壳蛋白

向上述体系中加入蛋白酶，37℃孵育30min，再加入超纯水稀释至总体积40μL，之后95℃加热5min，使蛋白酶失活。然后离心，取上清液用于qPCR检测。

3. qPCR和数据计算

取上清液稀释10倍后进行qPCR检测（至此已经将腺相关病毒原液稀释1000倍）。

病毒颗粒数（VP/mL）=标准曲线的对照值*1000（稀释倍数）。