给您发货一份——转染干货知识

一、 概念及应用

转染是指将外源分子如DNA、RNA等导入真核细胞的技术。基因转染技术不仅是研究转基因和基因表达的重要

工具，也是目前基因治疗的关键步骤。理想的基因转染试剂应该具有如下特点:高效转染:安全;低细胞毒性;

方法简单:省时、经济。

 二、分类

 1、瞬时转染，外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA 转染效率较高，在转染后24-72 小时内分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。

2、稳定转染，外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体存在。尽管线性DNA 比超螺旋DNA 转入量低，但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小，大约1/104转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶(APH:新霉素抗性基因)，潮霉素B磷酸转移酶(HPH)，胸苷激酶

(TK)等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。

 三、影响转染效率的因素

1.细胞培养物

转染时要求细胞代次不能太高(<50)，且最好处于对数期，生长旺盛。同时还需要一定的细胞密度，一般贴壁细胞铺板密度建议在70-90%，悬浮细胞铺板密度在2-4x100/ml细胞培养物一定要避免细菌，支原体或直菌的污染。

2. 血清

大多数培养基在使目前需要加而清，而清质量的变化自接影响转染效率，有些转染技术，如脂质体转染在有血清存在情况下效率很低，因此在转染前要去除血清。对于RNA转染，如何消除血清中潜在的RNase 污染是值得关注的。3 抗生素

培养基中添加的抗生素一般对于真核细胞无毒，但有些转染试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这可能间接导致细胞死亡，造成转染效率低。

4.载体构建

转染载体的构建(病毒载体，质粒DNA，RNA，PCR产物，寡核苷酸等)也影响转染结果，载体的形态及大小对转染效率也有不同的影响，如前面提到的超螺旋及线性DNA对瞬时和稳定转染的影响。如果基因产物对细胞有毒性作用，转染也很难进行。对于稳定转染最好选择诱导型启动子，对于瞬时转染可选择组成型启动子。

 5.DNA质量

DNA质量对转染效率影响非常大。一般的转染技术(如脂质体等)基于电荷吸引原理，如果DNA不纯，如带少量的盐离子，蛋白，代谢物污染都会显著影响转染复合物的有效形成及转染的进行。此外，对一些内毒素敏感的细胞(如原代细胞，悬浮细胞和造血细胞)，应利用除内毒素污染的质粒抽提试剂盒以保证理想的转染效果。

6.转染技术

目前的转染技术主要有磷酸钙法，阳离子脂质体，阳离子聚合物等，根据各方法的利弊选择一种合适的转染技术，许多转染方法需要优化DNA与转染试剂比例。

和元李记（生物） EZ Trans Plus 细胞转染试剂