CellTracker Blue CMAC,蓝色活细胞荧光探针

CellTracker Blue CMAC Dye（蓝色活细胞荧光探针）是一种非常适合监测细胞运动或位置的荧光染料。CellTracker Blue CMAC 荧光染料可自由穿过细胞膜进入细胞，并在细胞内转化为不透细胞膜的反应产物。 该染料可转移到子细胞中，但不会转移到群体中的相邻细胞中。 CellTracker Blue CMAC 染料设计为显示至少 72 小时的荧光，该染料具有理想的示踪特性：在工作浓度下稳定、无毒、在细胞中保留良好，在生理 pH 值下发出明亮的荧光。 此外，CellTracker Blue CMAC 染料的激发和发射光谱与 GFP（绿色荧光蛋白）和 RFP（红色荧光蛋白）光谱完全分离，可进行多路复用。

图1：CellTracker Blue CMAC结构式

CellTracker Blue CMAC优势

•易于使用—去除培养基，添加染料，孵育30分钟，进行细胞成像
• 荧光信号保留 >72 小时（通常3至6代）
• 适用于多通路技术的蓝色激发/发射光谱（最大值为 353/466 nm）
• 低细胞毒性—不影响活力或增殖

实验步骤：
1. 使用无水 DMSO 将 CMAC 固体溶解，配制成 10 mM 的储存液。使用无血清的培养基将储存液稀释至 0.5~25 μM 的工作液。在使用之前将工作液置于 37℃进行预热。
2. 根据不同的细胞类型在不同的细胞培养条件下孵育 15~45 分钟。对于悬浮细胞，离心弃上清，收集细胞沉淀。用预热的染色液重悬细胞；对于贴壁细胞，当细胞生长到合适的细胞密度，移除上清培养液，加入预热的染色液。
3. 移除染色液，加入新鲜预热的细胞培养基，37℃孵育 30 分钟。
4. 对于悬浮细胞，吸取 5 μl 左右染色后的细胞滴至载玻片上，加盖盖玻片，置于荧光显微镜下观察；对于贴壁细胞，直接观察即可。（可选）如需固定细胞，可先跳过步骤 4，待固定步骤完成后再做观察准备。
5. 使用 PBS 清洗细胞。
6. 使用含有 3.7%多聚甲醛的 PBS 固定细胞，室温孵育 15 分钟。
7. 使用 PBS 清洗细胞。
8. 如果需要可对细胞膜进行透化处理。当细胞需要进行抗体标记时，细胞膜的透化处理是有必要的，便
于促进抗原进入细胞。可以使用冰冷丙酮处理细胞 10 分钟，可以提供细胞的渗透性。

图2：CellTracker 蓝色、绿色和红色染料进行多色图像分析