DNA Ladders 故障排除（阶梯分离度低）

由于运行条件不当，DNA ladder 可能无法分离。请记住，DNA 分子在凝胶上的迁移速率取决于 DNA 的大小、琼脂糖浓度、施加的电压、琼脂糖类型和缓冲液 。

如果您遇到很少或没有分离，您应该做的第一件事就是将您的片段和 ladder 的大小与您提供的运行时间进行比较，以确保您为电泳留出了适当的时间。

接下来，您需要查看其他条件、施加的电压、琼脂糖浓度，并考虑可能需要更好优化的区域。

阶梯分离度低或无阶梯分离的可能原因

• DNA 大小的琼脂糖浓度不足。

• 电源不足。

• 琼脂糖的种类使用不当。

• 与用于 DNA ladder 的缓冲液相比，在凝胶中使用不同的缓冲液。

• 变性

条带分离度低或无条带分离的 DNA Ladders 故障排除

• 琼脂糖浓度与不同 DNA 大小的有效分离范围之间的关系。 大多数凝胶浓度在 0.5% - 2% 之间。

• 在电极之间使用 1-5V/cm 的电源。

• 使用传统的琼脂糖分离 DNA 片段。 使用聚丙烯酰胺分离小于 100 bp 的 DNA 片段。

• 如果您想分离分离的 DNA 片段，请使用低熔点琼脂糖。

• 使用小于烧瓶容量 1/3 的缓冲液体积。

• 使用与在 DNA ladder 中使用的相同的缓冲液运行凝胶。 最常见的凝胶电泳缓冲液是 TAE 和 TBE。

• 跑胶前不要加热 DNA ladder。 电泳过程中保持温度低于 30°C。

• pH 值也可以使 DNA 变性。 建议 pH 值为 8.0。 但是，这可能会根据制造商的建议而改变。

合适的琼脂糖浓度：

图1：合适的琼脂糖浓度表