大肠杆菌的基因敲除需要多久？

现在市面上最先进的技术是CRISPR-Cas9技术，敲除率几乎做到了100%。

所以下面我以CRISPR-Cas9技术为前提简单描述下，

1. 根据敲除基因序列设计sgRNA序列，构建Cas9-sgRNA敲除载体：需要1周左右

2. 融合PCR扩增，获得重组修复模板（缺失目的基因部分序列）：需要3-5天

3. 将敲除载体和重组修复模板共同转染到细菌内

4. Cas9-sgRNA复合体对目的基因进行切割，造成双链断裂（DSB）

5. 细菌利用带有部分目的基因缺失的重组修复模板对DSB进行修复，获得目的基因敲除菌株：第三至五条共需1-3周的时间

作者：海星生物      公众号：Cas9X细胞基因编辑

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