体外诊断试剂注册申报资料钩状效应/HOOK效应研究

1 概述

钩状效应即HOOK效应，是指由于抗原抗体比例不合适而导致假阴性的现象，其中抗体过量叫做前带效应；抗原过量叫做后带效应。

抗原抗体特异性反应时，生成结合物的量与反应物的浓度有关。无论在一定量的抗体中加入不同量的抗原或在一定量的抗原中加入不同量的抗体，均可发现只有在两者分子比例合适时才出现最强的抗原-抗体反应。

试验要求：

检测浓度从0至超出线性范围外的样本，以理论值为X轴，测量值为Y轴，分段进行回归分析，斜率及相关系数95%CI包括0的区段（即随样品浓度增大，测量值不再增加）为钩状效应区间。

试验方法：

选取含被测物的高值血浆（EDTA-Na抗凝）样本，必要时可添加被分析物的纯品，并计算出理论值。使用混合血清或5%牛血清白蛋白生理盐水溶液或测定方法要求的稀释液对高值待测样本进行稀释，稀释后的标本用对照试剂盒检测确定浓度（即下表中的标示值），然后用待测试剂盒重复测量3次，求平均值对理论浓度的相对偏差

批号1钩状效应测试结果（单位：ng/ml）

批号2和批号3数据略。

①以理论值为X轴，测量值为Y轴，绘制测量结果趋势图，如下：

②通过上述趋势图，在10-100ng/mL浓度范围内，理论值与测量值有较好的一致性，进行回归及方差分析，结果如下：

在该浓度区间内，理论值与测量值间有良好的线性关系，且斜率的95%CI包括1，截距的95%CI包括0，即理论值与测量值有较好的一致性，不存在比例误差和恒定误差，与线性范围研究结果一致。

③通过上述趋势图，在110-150ng/mL浓度范围内，理论值与测量值存在一定的偏差，进行回归及方差分析，结果如下：

在该浓度区间内，理论值与测量值间有良好的线性关系，但斜率的95%CI不包括1，截距的95%CI不包括0，即理论值与测量值不具一致性，存在比例偏差和恒定偏差。

④通过上述趋势图，在160-240ng/mL浓度范围内，检测结果趋于恒定，进行回归及方差分析，结果如下：

在该浓度区间内，斜率的95%CI包括0，相关系数的95%CI包括0，即随着理论值的增加，测量结果呈一条与X轴平行的直线，即该浓度区间内，测量值结果保持相对恒定，测量值与理论值不再存在相关性，发生明显的钩状效应。

⑤通过上述趋势图，在>240ng/mL浓度范围内，检测结果呈下降局势，进行回归及方差分析，结果如下：

回归分析斜率<0，从统计分析角度说明，在>240ng/mL浓度范围内，检测结果呈下降局势。

通过3批产品测试及分析结果得出，当样本浓度160~240ng/mL时，斜率及相关系数95%CI包括0，检测结果不再随被测物浓度增加而增加，呈现饱和状态，当样本浓度>240ng/mL时，斜率为负值，检测结果再随被测物浓度增加呈现下降趋势，被测物呈现过饱和状态。

综上，即浓度>160ng/mL时，产品会产生明显的钩状效应。