荧光标记活细胞标记膜前体蛋白/荧光标记βγ-cat蛋白/荧光标记连接蛋白
2022-08-29 10:28 作者:ruixishengwu | 我要投稿
淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)酶解过程,构建含有Swedish和APP717两种突变的荧光真核表达系统.方法以pcDNA3.0-APP为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)得到含有APP717突变的APP最后300个碱基片段(C99);以pcDNA3.0-CFP—CaM-YFP酶切产物为模板,通过PCR分别得到编码蓝色荧光蛋白(CFP)和黄色荧光蛋白(YFP)碱基序列;生物合成含有Swedish突变的APP中间54个碱基片段(54bp).利用基因工程技术将CFP,54bp,YFP,C99片段克隆至载体质粒pcDNA3.0中,通过酶切,PCR,测序鉴定最终得到重组质粒pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP-C99和pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP.
结果：(1)基因序列分析证明重组质粒构建成功.(2)利用多光子共聚焦显微镜观察转染细胞,显示融合基因能够准确表达蓝色和黄色荧光.(3)表达CFP-54bp—YFP的细胞有FRET现象,而表达CFP-54bp-YFP-C99的细胞中观察不到FRET现象.(4)利用多光子共聚焦显微镜发现CFP-54bp-YFP-C99转染的细胞中有YFP标记的Aβ产生并沉积在胞质胞膜以及细胞间隙中.(5)免疫细胞化学检测证实CFP-54bp-YFP—C99经过裂解可以产生Aβ,Aβ在细胞膜,细胞质,细胞间隙聚集沉积.
荧光标记重组灵芝免疫调节蛋白
荧光标记GSTP1蛋白
荧光标记乳蛋白
荧光标记抗原蛋白
荧光标记纳米颗粒包被哈氏弧菌抗原蛋白TssJ
星戈瑞荧光2022.8
