如何呵护皮肤相关研究中的明星细胞（永生化HSF细胞）?

近年来，人体组织再生和修复领域得到了广泛的关注。越来越多的研究机构和企业开始投入到相关领域的研究和开发中。HSF人皮肤成纤维细胞作为一种重要的细胞类型，将成为市场上的热门产品。

基本信息

细胞名称：HSF人皮肤成纤维细胞

组织来源：皮肤

细胞形态：成纤维细胞样

生长特性：贴壁生长

支原体：无

背景简介：该细胞系来源于一男性的皮肤组织，利用原代外植体方法提取原代细胞，转染含有SV40大T抗原的病毒建立的永生化人皮肤成纤维细胞系。

相较于原代细胞，该细胞系具有更稳定的连续增殖能力，可利用组织工程技术与其他细胞一同构建3D皮肤模型，在体外构建高度类似于人体皮肤的活性组织，是体外检测皮肤的核心工具，不仅可以避免动物实验带来的局限性，而且可以更加高效准确以及科学的评估化妆品的安全性。

常用于皮肤老化、伤口愈合、基因传递和硬皮病等皮肤疾病的研究，还可应用于化妆品对皮肤刺激及修复的检测。

细胞形态

细胞特点

1. 分泌功能

HSF人皮肤成纤维细胞具有很强的分泌能力。它们能够合成和分泌大量的胶原蛋白、弹力蛋白等结构蛋白质，这些蛋白质是构成皮肤组织的重要组成部分。通过分泌这些蛋白质，HSF人皮肤成纤维细胞能够帮助修复受损的皮肤组织，促进伤口愈合，并且保持皮肤的弹性和紧致度。

2. 增殖功能

HSF人皮肤成纤维细胞还具有较高的增殖能力。它们可以通过不断地进行有丝分裂来增加自身数量，并填补受损区域。这种增殖能力使得HSF人皮肤成纤维细胞在创伤修复过程中扮演着重要角色，确保了新生组织的形成和完整性。

3. 免疫调节功能

HSF人皮肤成纤维细胞还具有一定的免疫调节功能。它们可以释放一系列的生物活性物质，如细胞因子和生长因子，来调节免疫反应和促进组织修复。这种免疫调节功能对于皮肤组织的抗炎、抗感染等方面具有重要意义。

总之，HSF人皮肤成纤维细胞在皮肤组织中承担着多种重要功能。它们通过分泌结构蛋白质、增殖能力和免疫调节等方式，参与了皮肤组织的修复和保持健康。对于了解皮肤生理学以及相关疾病的治疗和预防具有重要意义。

材料准备

仪器

离心机、显微镜、计数器、水浴锅、恒温培养箱

试剂

HSF专用消化液Ⅰ、PBS磷酸缓冲液、0.25%胰蛋白酶溶液、HSF专用培养基、无血清细胞冻存液

耗材

培养皿、培养瓶、T75培养瓶、枪头、离心管、移液管

操作步骤

01

细胞复苏

将含有 1 mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4 mL 培养基混合均 匀。在 1000rpm 条件下离心 4 min，弃去上清液，补加 1-2 mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8 mL 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

02

细胞传代

如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1 mL 消化液于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按 6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000rpm 条件下离心 4 min，弃去上清液，补加 1-2 mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8 mL 培养基的新皿中或者瓶中。

03

细胞冻存

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1 mL 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1 mL 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1 mL 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和无血清细胞冻存液，轻轻混匀，无血清细胞冻存液最终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ mL，每支冻存管冻存 1 mL 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

免疫荧光检测

▲经免疫荧光鉴定，该细胞纯度达到 99%以上

▲HSF细胞成长记录

HSF细胞的应用

HSF人皮肤成纤维细胞是一种多形态、无色透明的细胞，形状呈长梭形或星形。细胞体积较大，约为10-30微米。成纤维细胞主要分布于真皮和皮下结缔组织中，是皮肤组织中最常见的细胞类型之一。

成纤维细胞的主要功能是合成和分泌胶原蛋白，这是皮肤组织的重要结构蛋白，负责维持皮肤的弹性和稳定性。胶原蛋白是一种具有高度有序的三维结构的蛋白质，它构成了皮肤的主要支撑结构，为皮肤提供了强度和弹性。在创伤愈合过程中，成纤维细胞还参与了胶原蛋白的再生和重建，并促进创面的愈合。

除了合成胶原蛋白，成纤维细胞还分泌一系列的细胞外基质分子，如弹性纤维素、透明质酸等，这些分子在维持皮肤组织的结构和功能方面发挥着重要的作用。成纤维细胞还可以分泌多种细胞因子，如白细胞介素、肿瘤坏死因子等，参与皮肤的免疫反应和炎症过程。

除了以上的功能，成纤维细胞还具有一定的分化能力。在某些特殊情况下，如组织损伤或病理状态下，成纤维细胞可以发生分化，转化为其他细胞类型。例如，在皮肤创伤愈合过程中，成纤维细胞可以分化为肌肉细胞、脂肪细胞等，以促进创面的修复和再生。

总结

HSF人皮肤成纤维细胞是一种重要的细胞类型，主要分布于人体皮肤组织中。它的主要功能是合成和分泌胶原蛋白，维持皮肤的结构和功能。此外，成纤维细胞还参与了创伤愈合、免疫反应和炎症过程，并具有一定的分化能力。HSF人皮肤成纤维细胞在研究皮肤生物学、创伤愈合、组织工程等领域具有重要的应用价值。

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