MyBioSource丨艾美捷代理肠激酶活性检测试剂盒

肠肽酶（Enterokinase，EC 3.4.21.9）是一种丝氨酸蛋白酶，参与胰蛋白酶原向胰蛋白酶的激活，进而导致各种消化酶的激活。它识别一个高度特异的氨基酸序列“DDK”，并在赖氨酸残基后裂解。肠肽酶的高比活性已被用于切割含有上述识别基序的多种天然或融合蛋白标签。在PRSS7活性检测试剂盒（荧光法）中，我们使用了一种含有肠肽酶识别序列的肽底物以及荧光标签“AFC”。肠肽酶催化该底物的裂解并释放AFC分子，可通过测量其在Ex/Em=380/500 nm处的荧光来轻松量化AFC分子。该检测试剂盒简单、快速，可检测低至1mU的肠肽酶活性。

MyBioSource  艾美捷 肠激酶活性检测试剂盒--利用含有肠激酶特异性识别序列且带有AFP荧光标记的多肽底物，在肠激酶的催化作用下，该多肽底物被裂解，并释放AFC分子，继而通过测量其在Ex/Em = 380/500 nm的荧光强度，达到检测肠激酶活性的目的。

AFC标准曲线（a）。用人肠肽酶检测试剂盒（b）的灵敏度。按照试剂盒方案进行分析。

MyBioSource 艾美捷该试剂盒化验程序：

1.AFC标准曲线：通过向90µl肠肽酶分析缓冲液中添加10µl 1 mM AFC标准溶液，将AFC标准溶液稀释至100µM（100 pmol/µl）。将0、2、4、6、8和10µl稀释的100µM AFC标准加入96孔板中的一系列孔中，以生成0、200、400、600、800和1000 pmol/孔的AFC标准。用肠肽酶分析缓冲液将最终体积调节至100µl。

2.样品制备：在96孔板的每个孔中加入1-50微升具有肠肽酶活性的样品。将5-10µl肠肽酶（阳性对照）添加到所需孔中。用肠肽酶分析缓冲液将阳性对照和样品孔的最终体积调节至50µl。平行制备带有50µl肠肽酶分析缓冲液的底物背景控制井和带有样品+肠肽酶分析缓冲液的样品背景控制井。

3.反应混合物：混合足够多的试剂，以满足要进行的分析数量。对于每个孔（样品、阳性对照和背景对照），制备50µl混合物，其中包含：

                   Reaction Mix                        Background Control Mix

Enteropeptidase Assay Buffer 48 µl 50 µl

Enteropeptidase Substrate 2 µl ---

4.测量：室温下培养30-60分钟，在Ex/Em=380/500 nm下测量荧光。

注：培养时间取决于样品中的肠肽酶活性。建议在动力学模式下测量荧光，并在线性范围内选择两个时间点（T1和T2）来计算样品的肠肽酶活性。AFC标准曲线可在终点模式下读取（即在培养时间结束时）。

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