善待生命！常见实验动物指导方针：采血/麻醉/安乐死
之前看过一篇这样的报道：
国内一位科研人员向《Scientific Reports》投稿遭拒。拒稿原因是该项研究在动物实验过程中，使用水合氯醛麻醉，而该物质作为麻醉剂，更应该是镇静剂，使用时其镇痛效果较差，并且有导致腹膜炎等的副作用，实验过程对动物不人道，在《AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals》中也不推荐使用。
因此，避免这样不必要的错误发生，了解动物实验指导方针很重要，建议做动物实验的同学先收藏！
《实验动物护理及使用指南》
实验动物是生命科学研究和发展重要的基础和支撑条件, 对医学发展和人类健康具有十分重要的意义。
动物实验是医学研究不可缺少的重要手段和方法, 但动物实验操作时不可避免地要给动物造成一定程度的恐惧、疼痛甚至需要献出生命。从实验动物福利伦理兴起至今, 许多国家和国际组织已经制定了相应的法律、法规。
如《美国动物福利法》、《英国动物保护法案》、《德国动物福利法》、《葡萄牙动物保护法》等，其中都涉及了实验动物的保护，特别是动物实验过程中的麻醉。
本文中用到的动物实验指导方针，参考标准就是《美国动物福利法》
参考网站：
https://research.umn.edu/units/iacuc/policies-guidelines/animal-use-guidelines-exceptions#surgery
此指南除了本文说到的血液采集/安乐死/麻醉，还包含镇痛/手术/给药途径，可以根据自己的需要去了解更多的标准化操作指南。
《实验动物的护理和使用指南》第八版；《AVMA动物安乐死指南》 2020年版，在科研科研三公众号，回复”实验1859”即可下载！
一、常见动物血液采集指导方针
参考网址：
https://research.umn.edu/units/rar/guidelines/blood-collection
动物血液采集指导方针记录的常见动物包括以下：
总结一下最常用的小鼠、大鼠、兔的血液采集标准。
更加详细的步骤以及其它动物的血液采集方针指南，可以在上文中的网页中浏览查看。
1、小鼠血液采集指导方针
小鼠血液采集指导方针总结表
2、 大鼠血液采集指导方针
大鼠血液采集方针总结表
3、兔血液采集指导方针
啮齿动物常见的采血程序介绍
二、安乐死的指导方针
参考网址：
https://research.umn.edu/units/rar/guidelines/euthanasia
安乐死指导方针记录的常见动物包括以下：
这里也只总结我们常用的老鼠、老鼠、沙鼠、仓鼠或其他小啮齿动物以及兔的安乐死方式。
其它动物的安乐死指导方针可以以上网页查看详情。
1、老鼠、老鼠、沙鼠、仓鼠或其他小啮齿动物安乐死方式
Carbon dioxide (CO2，二氧化碳)
Inhalation to effect. Flow rate must displace no more than 30% of the chamber volume/minute. Prolonged exposure may be required for neonates and fetuses.
Sodium pentobarbital（戊巴比妥钠）
≥100 mg/kg intraperitoneal (IP) or intravenous (IV). This is a controlled substance (DEA Schedule II). Dosing is the same for the commercial product Fatal-Plus®.
Euthanasia solution（安乐死溶液）
≥86 mg/kg IP or IV. Multiple pharmaceutical grade products available. Contains sodium pentobarbital 390 mg/ml + sodium phenytoin 50 mg/ml (dosing based on barbiturate concentration). This is a controlled substance (DEA Schedule III).
Cervical dislocation（颈椎脱位）
Use in conscious small rodents requires demonstrated technical skill (or must be performed only on unconscious/anesthetized small rodents). Use in rats >200 g to be performed under anesthesia only.
Decapitation（断头）
Use in conscious small rodents requires demonstrated technical skill (or must be performed only on unconscious/anesthetized small rodents). Use in rats >200 g to be performed under anesthesia only.
Isoflurane overdose（异氟醚过量）
Inhalation to effect. May require prolonged exposure to ensure death.
Injectable anesthetic overdose（注射麻醉过量）
Administration varies (IP or IV). Consult a Research Animal Resources (RAR) veterinarian regarding specific agents.
Anesthesia followed by potassium chloride（麻醉后氯化钾）
75-150 mg/kg KCl IV. Administer rapidly to effect.
Anesthesia followed by physical method（麻醉后物理方法）
Cervical dislocation, decapitation, exsanguination, bilateral pneumothorax.
2、兔安乐死方式
Sodium pentobarbital（戊巴比妥钠）
≥100 mg/kg IP or IV. This is a controlled substance (DEA Schedule II). Dosing is the same for the commercial product Fatal-Plus®.
Euthanasia solution（安乐死溶液）
≥86 mg/kg IP or IV. Multiple pharmaceutical grade products available. Contains sodium pentobarbital 390 mg/ml + sodium phenytoin 50 mg/ml (dosing based on barbiturate concentration). This is a controlled substance (DEA Schedule III).
Injectable anesthetic overdose（注射麻醉过量）
Administration varies (IP or IV). Consult an RAR veterinarian regarding specific agents. Anesthesia followed by potassium chloride（麻醉后氯化钾）
75-150 mg/kg KCl IV. Administered rapidly to effect.
Anesthesia followed by physical method（麻醉后物理方法）
Cervical dislocation, decapitation, exsanguination, bilateral pneumothorax
三、常见动物麻醉的指导方针
参考网站：
https://research.umn.edu/units/rar/guidelines/anesthetic-agents
动物麻醉指导方针记录的常见动物包括以下：
总结一下最常用的小鼠、大鼠的麻醉标准。
更加详细的步骤以及其它动物的麻醉方针指南，可以在以上网站中浏览查看。
1、小鼠
麻醉药物可以肠胃外或吸入给药。
麻醉剂的选择将取决于要执行的程序、研究目的和其他因素，例如动物年龄;对新生小鼠有特殊的考虑。
①小鼠麻醉方式
吸入麻醉：
异氟烷是首选吸入麻醉药物（当使用吸入麻醉剂时，使用烟罩或配备有气体清除系统的麻醉系统），推荐使用异氟烷的剂量：4-5%用于诱导；1-2%用于维持。
注射麻醉：（ IP（腹腔注射））
氯胺酮/甲苯噻嗪复方是小鼠首选的注射麻醉剂。下面列出了其他常用的注射剂。
氯胺酮+赛拉嗪（Rompun®） – 推荐
剂量：氯胺酮：80-120毫克/公斤;甲苯噻嗪： 5-10 毫克/千克
途径： 腹膜内 （IP）
持续时间： 30-45 分钟
注： 热支持至关重要。如果需要额外的麻醉剂，只需补充 1/3 剂量的氯胺酮。不要重新给药甲苯噻嗪。甲苯噻嗪可以用阿替帕唑（Antisedan®，1-2mg / kg SQ或IP）或育亨宾（Yobine®，0.5-1mg / kg IP）逆转。
氯胺酮+地西泮（安定®）
剂量：氯胺酮：100毫克/公斤;地西泮：5毫克/千克
路线：IP
持续时间：20-30 分钟
局部麻醉：
给药途径包括局部注射到粘膜（鼻、眼等），或直接注射到组织和神经束周围。
1）利多卡因：剂量：4mg/kg（0.4ml/kg 1%溶液）；
路线：局部渗透；
注：总剂量不得超过7mg/kg。起效快，持续时间短。
2）布比卡因：剂量：1-2mg/kg（0.4-0.8ml/kg 0.25%溶液）；
路线：局部渗透；
注：总剂量不超过6mg/kg。起病慢，病程长。
②新生小鼠麻醉方式
低温麻醉：
低体温应该只被执行在新生儿啮齿动物< 7天,不应该用于过程持续时间超过30分钟。
吸入麻醉：
新生啮齿动物的诱导时间可能比成年啮齿动物吸入麻醉更长。室中的诱导通常需要5%异氟醚，而维护（室或鼻锥）需要1-2%（流速=0.5-1L/min）。
注射麻醉：
氯胺酮/甲苯噻嗪是7天以上小鼠的推荐注射麻醉剂。用27G针IP注射50-150mg/kg氯胺酮和5-10mg/kg噻嗪(最大体积=0.5ml)。
2、大鼠麻醉方式
吸入麻醉：
异氟烷是首选吸入麻醉药物， 它有快速和可靠的发病和恢复。剂量：4-5%用于诱导；
1-2%用于维持。注释：500ml容器中300μL用于滴罐麻醉.
注射麻醉：（ IP（腹腔注射）
1）Ketamine + Xylazine (Rompun®) – recommended（Dose:Ketamine: 40-90 mg/kg +xylazine 5-10 mg/kg；Route: IP；Duration: 45-90 minutes）；（氯胺酮+甲苯噻嗪）
2）Ketamine + diazepam (Valium®)：Dose: Ketamine: 40-80 mg/kg + Diazepam: 5-10mg/kg；Route: IP；Duration: 20-30 minutes（氯胺酮+安定）
3）Pentobarbital (Nembutal®)：Dose: 40-50 mg/kg ；Route: IP；Duration: 80-90 minutes（戊巴比妥）
局部麻醉：
给药途径包括局部注射到粘膜（鼻、眼等），或直接注射到组织和神经束周围。
1）利多卡因：剂量：4mg/kg（0.4ml/kg 1%溶液）；路线：局部渗透；注：总剂量不得超过7mg/kg。起效快，持续时间短。
2）布比卡因：剂量：1-2mg/kg（0.4-0.8ml/kg 0.25%溶液）；路线：局部渗透；注：总剂量不超过6mg/kg。起病慢，病程长。
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