说菇论菌D35 | 再次证实！肝癌辅助复合菌菇多糖，可“诱骗”癌细胞自杀

长期以来，肿瘤被认为是细胞失控增生的结果。

现在研究表明，许多人类恶性肿瘤是其细胞的死亡过程严重受阻，而使肿瘤细胞在数量上无限恶性增生的结果，这种增殖与死亡的平衡失调，目前认为是由细胞凋亡的调节紊乱引起的。

当细胞凋亡受抑，原本在正常监控下，应被机体加以清除的恶变细胞在体内不协调增殖，从而发生肿瘤。

现在临床上常用的肿瘤化疗药物，均能诱导肿瘤细胞凋亡，它们通过干扰肿瘤细胞生长、代谢、增殖等过程，最终触发肿瘤细胞程序化死亡通路。

但恶性肿瘤患者接受治疗的代价是——免疫力降低、各脏器官损伤、消化道反应、骨髓抑制等等不良反应。

在抗癌药物研究中，已经被多方证实的药用菌菇多糖：具有抗肿瘤﹑免疫调节、降血糖﹑抗病毒、抗氧化、抗辐射﹑抗疲劳等生物活性〔1〕。

尤其单一菌菇多糖的抗癌作用已有不少文献报道，比如唐小平等报道了香菇多糖；冯仲珉等报道了人参粗多糖；李绍平报道了冬虫夏草多糖的抗肿瘤作用等。

而复合菌菇多糖的抗癌研究报道，虽然不算很多，但根据研究结果来看：

一些多糖复合作用时，它们之间会相互协同、相互配伍，发挥出各自所不具备的其他作用。尤其复合多糖配伍成合剂，或与药物结合，或许可以发挥协同作用，使其药效增倍〔1〕。

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2008年，《中医药导报》中就发表了一篇：复合菌菇多糖针对肝癌抗癌作用的实验研究〔2〕。

研究结果表明：

复合菌菇多糖在一定剂量下，不仅可以提高免疫细胞功能，还会以某种方式“诱骗”癌细胞凋亡，并对癌细胞的增殖，有抑制作用。

01

 | 实验背景 | 

1>肿瘤细胞株及动物：

人肝细胞癌细胞株 Bel- 7402，购于中山大学实验动物中心细胞库；用RPMI 1640培养液37 ℃ CO2培养箱中培养；BALB/c裸鼠，雌雄各半，4-6周龄，体重18-22 g。60只，购于广州中医药大学实验动物中心（动物合格证号：0015789）。

2>药物及试剂：

由香菇多糖、人参粗多糖、冬虫夏草多糖等组成的复配多糖试剂。

02

 | 实验方法 | 

01实验一：复合多糖对人肝细胞癌细胞株 Bel-7402小鼠细胞免疫功能的影响 (T淋巴细胞转化功能测定) 。

用BALB/c裸鼠60只，其中50只皮下接种Bel-7402细胞悬液 (2×107 /mL)0.2 mL，次日随机分组 ，称重编号。

分组如下 ：

复合多糖高剂量组 (1.5 g/kg)；复合多糖中剂量组 0.75 g/kg)；复合多糖低剂量组 (0.25 g/kg)；环磷酰胺组 (100 mg/kg)；蒸馏水对照组 ；余未接种肿瘤 10只小鼠，作正常对照组。

连续给药10 d。

02实验二：细胞增殖抑制实验(MTT法)

将已配置好的细胞悬液接种于96孔细胞培养板中，每孔190 μL，置37 ℃ CO2培养箱中培养 24 h后，分别加入对照药物或实验药物（复合多糖）。

实验分为：

(1) 实验组：药物终浓度40，20，10 mg/L；

(2) 对照组：

A：阴性对照(RPMI 1640培养液)；

B：阳性对照(5-Fu：终浓度 5 mg/L，DDP：终浓度5 mg/L)；

每组设 6个复孔。实验重复3次。

03实验三：细胞凋亡的检测

采用Annxein-V-PI双标流式凋亡检测试剂盒进行操作。

Annexin-V-FITC和PI双阴性为活细胞，An－nexin-V-FITC阳性而PI阴性为早期凋亡细胞，An－nexin-V-FITC和PI双阳性为晚期凋亡细胞，Annex－in-V-FITC阴性而 PI阳性为坏死细胞。

03

 | 实验结果 | 

实验一：复合多糖对人肝细胞癌细胞株 Bel-7402小鼠细胞免疫功能的影响（见表 1、图1）。

 

表1示，复合多糖各剂量均可提高 Bel-7402小鼠的淋巴细胞转化功能，其中 1.5 g/kg组SI值明显高于蒸馏水对照组 (P<0.01)。

结果证明：

复合多糖能提高免疫功能。

实验二：复合多糖对Bel-7402细胞株增殖的影响（见表2、图2）。

表2示，复合多糖对Bel-7402细胞株增殖具有抑制作用。差异有统计学意义；复合多糖10 mg/L，24，48，72 h，细胞抑制率分别为16.04％，12.84％，2.30％；复合多糖在低浓度时无细胞生长抑制作用。

结果证明：

复合多糖对癌细胞的增殖有抑制作用。

但复合多糖的浓度，直接影响抑制率，

浓度越高，抑制率越高。

实验三：复合多糖对Bel-7402细胞株细胞凋亡的影响（见表3、图3）。

 

表3示，Annexin-V/PI双标流式术检测不同浓度复合多糖作用，以及24，48，72 h对细胞凋亡的作用，结果发现随着复合多糖浓度的增加，Bel-7402细胞株细胞凋亡率递增。同时检测了复合多糖作用不同时间后对Bel-7402细胞凋亡的影响，结果显示复合多糖以时间依赖方式诱导Bel-7402细胞凋亡。

结果证明：

复合多糖可诱导癌细胞凋亡，且复合多糖浓度越高，坚持采用复合多糖的时间越久，

癌细胞的凋亡率也会随之增加。

▌权威出处：

〔1〕《上海中医药》杂志2016 年第 50 卷第 3 期；《复合多糖药理活性研究进展》（杨丹，任谓明，王艳红，陈 颖，宋欣遥，周秋秋，李月茹）〔2〕《中医药导报》 2008 年12 月 第 14 卷第 14 期；《复合中药多糖对人肝癌Bel-7402细胞株抗癌作用研究》（李白霓，陈伟强，魏凤香，毛建文，张咏莉，李红枝）