hoechst 33342（染色原理、染色步骤、光谱）

Hoechst 33342 Staining Dye Solution 是一种用于在荧光显微镜下标记 DNA 的荧光染料。 该产品可用于荧光显微镜、微孔板、比色皿和流式细胞仪应用。 它还可用于通过绘制标准排放-含量曲线来检测样本 DNA 的含量。

hoechst 33342染色原理

Hoechst 33342 渗透细胞膜并与富含 A/T 的 dsDNA 序列的小沟结合，从而优先染色细胞核。

Hoechst 33342 (in blue) binding dsDNA.

hoechst 33342染色步骤

1. 将荧光染料（Hoechst 33342、AO、PI 或 EB）以合适浓度直接添加到细胞培养基中。

2. 将细胞孵育 5 分钟。

3. 在倒置荧光显微镜下直接观察细胞。

如果需要，在对转染细胞进行重要染色后修复细胞，以进一步详细分析形态：

1.用PBS清洗细胞（此步骤可省略），然后用4%（w/v）多聚甲醛或1%（v/v）戊二醛室温固定细胞5分钟。

2. 用 PBS 清洗细胞。

3. 将样品用 PermaFluor 水性封固剂封固，并在配备适当滤光片的荧光显微镜下检查细胞。

洗涤应尽可能轻柔，以尽量减少死细胞的损失。

Hoechst 33342 激发/发射光谱

当与 dsDNA 结合时，Hoechst 33342 在紫外范围 (350 nm) 内具有最大激发波长，并且染料可以在最大发射波长 461 nm 的蓝色通道中被最佳检测（图 2）。 Hoechst 33342 在激发和发射波长之间具有特征性的宽斯托克斯位移，当需要良好的光谱分离以减少荧光干扰时，例如在免疫荧光显微镜的染色质复染中，这种染料是最佳选择。

Hoechst 33342 激发和发射光谱。 最大激发波长为 350 nm（蓝色），最大发射波长为 461 nm（红色）。