关于牛血清白蛋白修饰超氧化物歧化酶的化学修饰过程

关于牛血清白蛋白修饰超氧化物歧化酶的化学修饰过程

今天小编整理并分享关于牛血清白蛋白修饰超氧化物歧化酶的化学修饰过程：

修饰过程：

方法 :用戊二醛作为交联剂 ,用牛血清白蛋白 (BSA)将牛红细胞超氧化物歧化酶进行化学修饰 ,得到SOD的修饰酶.对比研究三种SOD:修饰酶 ,混合酶及天然酶的理化性质。

修饰酶的制备：

将1mg soD 冻于粉(比活3300u/mg)溶于500pl 5mmolL,pH 7.0磷酸缓冲液中。准确称取2.5mg 牛血清白蛋白(BSA),溶于200pl 5mmol L, pH 7.0_磷酸缓冲液中。取250pul SOD(660Ou ml)与上述BSA溶液混合均匀。

置于冰水浴中,缓慢加入10pl 25%的皮二醛水溶液,反应3h后,加入20mg 甘氨酸终止反应,然后加 3mg固体硼氢化钠,直至溶液由黄绿色变成无色。用SmmolL, pH 7.0的磷酸缓冲液在4℃透析24h,每8h换1次缓冲溶液,得到牛血清白蛋白修饰的SOD(修饰酶)。

另取125ml SoD( 6600u/ml)加BSA 得到酶液(混合酶),其余125pulsOD放在Ep管作为对照(天然酶),4℃冰箱保存。

结果 :修饰酶等电点降低 ,对温度,pH的稳定性较天然酶有很大提高 ,对胰蛋白酶和胃蛋白酶也表现出很强的耐水解性.二价离子Mg2 + ,Mn2 + 对三种SOD活力均有不同程度的抑制作用 ,Ca2 + ,Zn2 + ,Cu2 + 对修饰酶活力有激活作用 ,一价离子K+ 对三种OSD活力均无明显影响.

结论 :修饰酶较天然酶的稳定性有很大的提高 ,加入Ca2 + ,Zn2 + ,Cu2 +可提高修饰酶的活力。

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是一类广存在于生物体内的金属酶，能催化超氧阴离子(02-)歧化反应，是体内氧自由基的天然清除剂，与过氧化氢酶(catalase，CAT)协作，具有防御氧毒性，增强机体抗辐射损伤的能力，可用于治疗氧自由基诱发的肿瘤，炎症，缺血-再灌注损伤，和诸如帕金斯综合症，老年痴呆症，肌萎缩性(脊髓)侧索硬化等神经性病变。

但是SOD在体内半衰期短，稳定性差，具有异源蛋白免疫源性，及细胞膜的通透性差等缺点，限制了其临床应用。为克服SOD的这些缺点，国内外已有很多研究，试图用脂质体包埋，人工合成类SOD活性物质和化学修饰的办法进行解决，SOD的化学修饰技术被广为研究和应用。

Daphnetin-BSA

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