PKH26红色荧光细胞链接试剂盒操作注意事项

PKH26荧光细胞连接试剂盒采膜标记技术，能够将带有较长脂质尾巴的⻩⾊-橙⾊荧光染料结合到细胞膜脂质区域上。染⾊⽅式依赖于细胞与膜的类型，主要⽤于细胞体外标记、体外细胞增殖研究及体内外细胞示踪研究。

艾美捷 Biogradetech PKH26红色荧光细胞链接试剂盒：

中文名称：PKH26红色荧光细胞链接试剂盒

英文名字：PKH26 Cell Linker Kit

Biogradetech货号：B-CHK104-0.1mL

规格：0.1mL

保存建议：PKH26红色荧光细胞链接试剂盒室温保存

试剂盒提供染⾊过程所需溶剂（稀释液），该溶剂可以可以在染⾊过程中，增加染料溶解度和染⾊效率，同时维持细胞活⼒。稀释液与哺乳动物细胞等渗，不含去垢剂或有机溶剂，也不含⽣理盐⽔和缓冲盐。根据细胞类型及标记后细胞膜内在的变化，标记后的细胞表⾯会由均⼀透亮变得有点状凸起或补丁状。但在⽣理范围内，PKH26荧光不受pH的影响，每个细胞的荧光强度与染料标记位置⽆关。PKH26 荧光稳定性强，在⻩⾊-橙⾊区域（λex=551nm, λem=567nm），可⽤来标记追踪体内外多种细胞。在细胞毒性分析，荧光蛋⽩、抗体或 DNA 染料在该区域发出的紫⾊、绿⾊、红⾊和远红外等，不会与 PKH26 产⽣⼲扰。

组份：

PKH26 染料：0.1ml 稀释液：10ml

储存条件：

避光冷藏，⽤前检查结晶，如有结晶需在 37℃⽔浴溶晶。因在⼄醇中贮藏，所以要盖紧防挥发。稀释液 C：常温或冰箱保存，⽆防腐剂和抗⽣素，保持⽆菌。

所需材料：

均匀的单细胞悬液；含⾎清培养基；⽆⾎清培养基或不含 Ca2+Mg2+的PBS 液；⾎清、⽩蛋⽩或与培养基兼容的蛋⽩源；聚丙烯锥形离⼼管；温度可控的离⼼机（0-1000g）；荧光分析仪（荧光计，荧光显微镜，流式细胞仪， 荧光图象分析仪）；超净台；细胞计数仪；载玻⽚。

操作注意：

快速均匀的混合对标记也很重要，为获得最佳效果应采取下述措施：

1）混合时细胞悬液和⼯作染液应等量；

2）避免染太多(>5ml)或太少（<100ul）的液体。避免⽤沾⾎清的移液管加染料；

3）液体量应尽可能精确以保证细胞和染料浓度被精确复制。

4）染料和稀释液作⽤于细胞的时间尽量短，可⽤稀释液按上述步骤作⽤于细胞看其受损程度。

5）加等量⾎清终⽌反应，在终⽌染⾊反应前别离⼼稀释液中的细胞，清洗时⽤含⾎清培养基可增加清洗效果。6）细胞应单独移⾄新试管中离⼼，清洗 3 次时不⽤稀释液⽽⽤培养基。

7）可⽤于体外⼲细胞、淋巴细胞、单核细胞、内⽪细胞等的标记较理想。

8）全细胞标记应先于单抗染⾊的标记，当 4℃单抗染⾊时细胞跟踪探针将保持稳定；如后于单抗染⾊的标记，很可能出现“盖帽”现象。

9）染⾊细胞⽤ 2%多聚甲醛固定稳定性达高。