N-糖蛋白的糖链鉴别及相对含量测定

糖基化修饰是细胞中最普遍的翻译后修饰方式之一，通过共价结合糖链影响蛋白的结构、活性以及定位等使蛋白具有多种多样的生物学功能，参与调节不同的生命活动进程。根据所结合的糖链的类型可以将其分为N-糖基化和O-糖基化。N-糖基化将N-聚糖共价连接到蛋白质特殊氨基酸序列的天冬酰胺残基上，是生物药物尤其是单克隆抗体上最广为人知的糖基化形式。 N-聚糖结构通过影响药代动力学、药效学和免疫原性等进一步影响其药效，是生物制药产品中的关键质量属性，这使得N-聚糖结构的表征分析成为生物制药发展过程中必不可少的部分。

N-糖蛋白糖链的鉴定是一项复杂且充满挑战的工作，需要解析的糖链结构包括特定位点是否连接有多种不同的糖链、各糖基的排列顺序、糖基本身异构体的构型、糖基的环化形式、糖基相互之间的连接方式以及分支特点等。目前还没有任何一种技术能解决所有问题，也不具备规模化直接分析糖链组成结构的技术条件，常用的解析糖链结构的方法有色谱法、串联质谱法以及核磁共振法等。

相比糖链的结构分析，糖链的含量鉴定就显得容易得多。为了确定糖蛋白的平均含糖量或糖基化位点的占有率，可利用MALDI-TOF-MS直接测出糖蛋白的相对分子质量，同时利用糖苷内切酶切除糖链并获得蛋白质部分的相对分子质量，利用这两部分的平均相对分子质量进而求得糖蛋白的平均含糖量。此外，还可通过传统的SDS-聚丙烯电泳和高效液相色谱法进行糖链含量的鉴定。