CD63抗体偶联磁珠外泌体/外泌体标记蛋白分子PLAP/蛋白CD9/蛋白LAMP的制备研究

2022-04-27 15:48 作者:瑞禧生物小晓 0人读过 | 我要投稿

今天瑞禧生物小编为大家分享的是CD63抗体偶联磁珠外泌体/外泌体标记蛋白分子PLAP/蛋白CD9/蛋白LAMP的制备研究，和小编一起来看看！

基于CD63抗体偶联磁珠的外泌体分离方法﹐包括以下步骤:

S1:在streptactin磁珠的表面修饰CD63抗体,得到CD63抗体偶联磁珠;

S2:过滤待测细胞培养上清液样本,将过滤后的待测细胞培养上清液样本与CD63抗体偶联磁珠混合并孵育﹐得到孵育后的混合物;

S3:分离S2中孵育后的混合物,得到磁吸附物和分离液;

S4:洗涤磁吸附物,将洗涤后的磁吸附物与洗脱缓冲液混合并孵育﹐使固液分离,收集外泌体提取液。

2.根据权利要求1所述的一种基于CD63抗体偶联磁珠的外泌体分离方法,其特征在于，所述S2中,待测细胞培养上清液样本与CD63抗体偶联磁珠的质量比为500ul:0.3~0 .5mg。

3.根据权利要求2所述的一种基于CD63抗体偶联磁珠的外泌体分离方法,其特征在于，所述S2中,待测细胞培养上清液样本与CD63抗体偶联磁珠孵育的时间为10-15min,孵育温度为4℃。

4.根据权利要求1所述的一种基于CD63抗体偶联磁珠的外泌体分离方法,其特征在于，所述S4中,洗涤磁吸附物的次数为2-3次。

5.根据权利要求1所述的一种基于CD63抗体偶联磁珠的外泌体分离方法,其特征在于，所述S4中,洗涤后的磁吸附物与洗脱缓冲液的质量比为0.5mg :0.5～1mL。

6.根据权利要求5所述的一种基于CD63抗体偶联磁珠的外泌体分离方法,其特征在于，所述S4中,磁吸附物与洗脱缓冲液孵育时间为10min。

7.根据权利要求6所述的一种基于CD63抗体偶联磁珠的外泌体分离方法,其特征在于，所述S4中,将洗涤后的磁吸附物与洗脱缓冲液混合并孵育使固液分离时,洗脱缓冲液洗脱的次数为2-3次。

可获得高纯度的外泌体,不影响外泌体的结构形态和生理功能﹐分离特异性强,重复性好,提高了对外泌体的捕获效率,并在温和条件下无损释放捕获的外泌体,以达到回收外泌体用于后续研究的目的,操作简单快速,解决现有技术中外泌体分离方法分离纯度低、影响外泌体功能分析及工程化应用的缺陷问题。

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