实验诊断学-血液一般检测、血型鉴定操作

一、血液一般检查

1.白细胞计数

1）定义：用白细胞稀释液将血液稀释一定倍数，将稀释后的白细胞悬液冲入计数板，显微观察计数一定体积内的白细胞，再换算为每升血液中的白细胞数。

2）试剂：冰醋酸（溶解RBC）；美兰（与RBC稀释液区别）

3）采血部位：采用末梢血（左手无名指内侧）或静脉血（肘前静脉）

4）抗凝剂：EDTA

5）微量吸管：一个刻度10ml。右手中指和拇指按压皮头，食指按住上方小孔。横拿吸管。吸管中吸入的多余血液可以用纸吸走。

6）计数区：9个大方格。

（1）中间大方格计数红细胞和血小板，分成25个中方格，每个中方格再分为16个小方格；

（2）四角大方格用于计数白细胞，每个大方格再分成16个中方格。

（3）每一个大方格内的体积：1mm×1mm×0.1mm=0.1mm3=0.1μL

7）操作过程：0.38ml白细胞稀释液+20μL血液混匀，吸取10ml混悬液冲池（从盖玻片和计数池的支柱缝隙内打进去），低倍镜计数白细胞。

（1）观察四角大方格的顺序：左上、左下、右上、右下

（2）计数公式：WBC/L=四个大方格WBC总数N/4×10×20×10^6

（×10换算成1μL；×20稀释倍数，0.02ml稀释成0.4ml是20倍；这时单位是WBC/μL，要换算成WBC/L正好要再乘10^6）

（3）计数方法：弓形移动，数上不数下，数左不数右。

8）参考范围：成人3.5-9.5×109/L，新生儿15×109/L。

9）注意事项：

（1）如果每个大格之间细胞数相差>8个时，应重新冲池计数；

（2）白细胞数量过低时，如<3×10^9，可以数八个大格内的细胞数，或者吸40μL血减少稀释倍数，结果除以2。

（3）白细胞数量过高，可以增加稀释倍数，如如>30×10^9，可以1：100稀释。

（4）白细胞稀释液只破坏无核RBC而有核RBC则无法破坏

2.红细胞计数

1）原理：等渗稀释液将血液稀释冲池，显微镜下计数，再换算。

2）器材：吸耳球

3）操作过程：1.99ml稀释液+10μL血液摇匀，冲池静置。

4）计数中央大方格计数RBC：

（1）在25个中方格中选择四个角以及中央的五个中方格，分别技术这五个格里面的RBC数。

（2）计数公式：RBC/L=五个中方格RBC总数×5×10×200×10^6

（×5：25个中方格；×10：每一个大方格容积0.1μL，换算成1μL；×200：0.1μL换算为了2ml；×10^6: 这时单位是WBC/μL，要换算成WBC/L正好要再乘10^6）

（3）计数方法：同白细胞计数。

5）参考值：男4.0-5.5×10^12；女3.5-5.0×10^12；新生儿6-7×10^12

3.血小板计数：

1）原理：血液用稀释液稀释后，混匀注入计数池，低倍镜计数再换算。

2）稀释液：草酸铵（同时破坏RBC、WBC）

3）操作过程：0.38ml血小板稀释液+20μL血液混匀，吸取10ml混悬液冲池，低倍镜计数

（1）计数区与RBC相同。

（2）计数公式：PLT/L=五个中方格PLT总数×5×10×20×10^6

（×20稀释倍数，0.02ml稀释成0.4ml是20倍）

4）参考值：100-300×10^9

※假性血小板减少：使用EDTA抗凝可以诱导PLT聚集或巨大血小板的存在。

5）注意事项：

（1）区别杂质和血小板：调节准焦螺旋时，杂志不会随着发生改变，而血小板因为胞质有折光性而会产生变化。

（2）冲池时摇匀，等待血小板完全下沉后再计数。

 

二、血型鉴定

1.定型原理

1）正向定型：标准的抗A、B血清鉴定红细胞膜上的抗原。

2）反向定型：标准的A型和B型红细胞鉴定被检者血清中的抗体。（加做O型红细胞，结果为阴性，可以排除冷凝集现象）

2.注意事项：

1）标准抗A、抗B不能混淆，不能混用棉签

2）新生儿体内存在母亲输送来的血型抗体，自身抗体效价低，不宜做反向定型。

3）老年人抗体水平下降，易引起假阴性。但是不代表老年人血型鉴定不做反向定型。

 

参考：诊断学（第九版）-人民卫生出版社