小鼠胰岛β细胞的高效分离与培养

本文详述小鼠胰岛β细胞的精准分离和规范培养流程，涵盖所需实验材料、试剂及仪器信息。

实验材料与试剂：该实验选用3-4周龄的昆明小鼠。主要试剂包括小鼠胰岛β细胞专用培养基、DMEM基础培养基、胎牛血清、混合胶原酶和Percoll等，均购自无锡菩禾。

实验仪器：涉及的仪器有CO2恒温培养箱、恒温水浴摇床、低速台式离心机、解剖显微镜和相差显微镜，分别由SANYO、常州市国立试验设备研究所、湘仪离心机仪器有限公司、凤凰光学集团有限公司和OLYMPUS生产。

分离步骤：实验动物经75%酒精消毒后，先以脱白法处死，进而剪开腹部、分离脏器并夹住胆管。随后，用胶原酶溶液缓慢灌注胰腺，然后切除胰腺并去除脂肪及结缔组织。胰腺在预冷胶原酶溶液中38℃水浴10分钟，再用含10%FBS的DMEM HIGH培养基终止消化。

培养步骤：细胞经PBS冲洗和Percoll密度梯度分离后，用胰蛋白酶进行37℃消化以得到单个胰岛细胞。这些细胞随后在37℃、5% CO2的条件下用小鼠胰岛β细胞专用培养基培养。当细胞融合达到80%~90%时，即可用于后续实验。

通过以上规范操作，可实现小鼠胰岛β细胞的高效分离与培养，为后续实验提供了质量可控的细胞材料。