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脱氧核糖核酸酶 (DNase) 测试 - 原理、程序、用途、结果解释

2022-10-20 16:48 作者:biofount科研试剂  | 我要投稿

进行脱氧核糖核酸酶 (DNase) 测试以了解生物体水解 DNA 并将其用作碳源的能力,而碳源又将用作生物体生长的能量。

一种 DNase 琼脂培养基,呈淡绿色,主要用作差异培养基。 它具有细菌生长所需的营养。

如果培养基中的有机体将 DNA 分解成更小的片段,它就有能力产生脱氧核糖核酸酶。 DNA 分解的一个指标是它不与甲基绿结合。 颜色最终会消失,您会注意到菌落周围有一个无色区域。

图1:DNA水解测试; A象限和B象限呈阳性,而C象限呈阴性。

图2:阳性 DNase 测试的特点是接种线周围有一个清晰的区域。 如果琼脂始终保持绿色和透明,则测试为阴性

DNase Test 的用途是什么?

进行它是为了找出生物体水解脱氧核糖核酸的能力。

它有助于区分具有产生脱氧核糖核酸酶能力的金黄色葡萄球菌和其他不具有产生 DNase 能力的葡萄球菌。

它可用于进行凝固酶测试,尤其是在没有血浆时。 它也是比凝固酶测试更可靠的测试,因为有时凝固酶测试的结果难以解释。

它能够区分卡他支原体与人类来源的革兰氏阴性双球菌,如淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌。

实验准备

媒介

  • DNase琼脂(含甲基绿指示剂)

试剂

  • 盐酸,但仅在介质没有指示剂时使用。

  • 本生灯

  • 接种环

脱氧核糖核酸酶 (DNase) 测试如何进行?

注意:确保琼脂板表面清洁干燥。 通过简单地在板上画线将琼脂板分成三部分。

图 3:板的左侧测试为阴性,而右侧的 DNase 测试测试为阳性。

接种

接种可以通过两种方式进行。

1.点接种——使用一个环,接触一个有机体菌落并接种到盘子的一小块区域上。 它通常放置在板的一个部分的中心。 孵化后,您会注意到直径约 10 毫米的厚斑块的生长。 将板在 37 摄氏度下孵育至少 24 小时。

2.条带/线条纹接种 – 使用大量约 4 厘米长的接种物画一条线。 从边缘开始,直到琼脂板的中心。 在 37 摄氏度的温度下孵育至少 24 小时。

注意:如果您使用的介质没有指示剂,您需要做的是加入足量的 1N 盐酸。 让它在那里静置几分钟,以便试剂可以完全吸收到板中。 几分钟后,在深色背景下检查板。

结果解释

阳性

阳性结果的特征是测试生物体周围有无色介质。 这意味着被测试的生物体具有水解 DNA 的能力。 DNase 测试阳性生物的例子有:

  • 金黄色葡萄球菌

  • 粘质沙雷氏菌

  • M.卡他哈利斯

  • 一些空肠弯曲杆菌菌株 

阴性

如果介质的颜色(绿色)保持不变,则测试为阴性。 它只是意味着被测试的生物体没有水解 DNA 的能力。 例子是:

  • 表皮葡萄球菌

  • 淋病奈瑟菌


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