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旷场实验与高架十字迷宫丨实验案例:研究熏香对小鼠的安神作用

2023-03-05 19:38 作者:知鼠达理  | 我要投稿

熏香介绍

我国传统中药熏香有着悠久的历史,在古代日常生活及医疗活动中广泛应用。自春秋战国时起,香料植物在中原地区已经有了广泛的利用,人们将其用于熏香、辟秽、驱虫、医疗养生等多个领域。

熏香分为传统熏香和现代熏香:

传统熏香:利用的主体是香料物质本身,包括香汤沐浴、佩戴或涂抹熏香、焚烧熏香、隔火熏香等,其制备原料以香熏植物为主,兼有芳香、观赏和药用等属性的植物,如檀香、肉桂、桂枝、白芷、香附子、当归、地黄、干姜等,这些植物多数为中草药植物,这说明利用无毒无公害的中草药制备熏香将成为研究热点及趋势。

现代熏香:随着时代与科学技术的不断发展,现代熏香主要是利用植物精油进行熏香,植物精油我们常常称之为液体黄金,可见其少且珍贵。

本文研究根据小鼠本身的生理特点、生活习性结合高架十字迷宫实验和旷场实验,分析熏香与小鼠安神作用之间的关系。本研究从以中草药为材料制熏香的角度探究熏香对小鼠安神方面的作用,能够为研究以中草药为原料制备熏香奠定理论基础。

1材料与方法

1.1制熏香实验材料

1.1.1中药材料

中草药材香茅草、合欢花、地榆、黄蜀葵的中药粉末;

普云芽庄沉香、普云艾草天然驱蚊熏香。

1.1.2动物

SPF级,C57BL/6J小鼠,雄性,10周龄,体质量20g~23g。

1.1.3主要仪器

制香工具一套(实木晒项网盘、AK线香挤泥枪、线香针管、理香尺等)、烧杯、量筒、玻璃棒、电子天平、行为学软件。

动物行为学分析软件Visutrack,XR-VT,上海欣软

小鼠旷场行为测试箱:长×宽×高为50cm×50cm×50cm的木制箱。底面用黑线划分成面积相等的25个正方形方格,每行和每列各5个方格,中心9格为中央区。

小鼠用高架十字迷宫(elevatedplus-maze,EPM),由两个开放臂(openarm,长×宽为50cm×10cm)、两个相对封闭臂(closearm,长×宽×高为50cm×10cm×50cm)、一个中央平台(centralplatform,10cm×10cm)构成,材料黑色塑胶。开放臂、封闭臂相互垂直呈十字状,迷宫固定于十字支架,支架高50cm。

1.2方法

1.2.1熏香制备研究

将香茅草、合欢花、地榆粉、黄蜀葵、沉香按照一定比例混合蒸馏水制成线香。以合欢花为主药(有效成分),进行加减配伍,以熏香的续燃程度、香味为筛选标准,筛选熏香。通过与购买的沉香、艾草进行实验对比,熏香15min,比较本项目所制熏香的燃香时间及香味。

1.2.2动物分组

将小鼠平均分成11组,每组3只进行试验。

(1) 空白组:不对其进行熏香处理;

(2) 沉香组(阳性对照组):对其进行普云芽庄沉香的熏香处理;

(3) 艾草组(对照组):对其进行普云艾草天然熏香处理;

(4) 实验组:共8组,分别用熏香制备中选出的香进行熏香处理。

1.2.3旷场实验

采用旷场实验检测小鼠的趋避性和焦虑水平,旷场箱(长50cm、宽50cm、高30cm),无顶长方体,内部四壁及底面涂成黑色,正中格正上方安置摄像头。观察小鼠5min内的自发活动,注意保持环境安静、温度适宜,每次测试时握住小鼠尾巴根部1/3处将小鼠迅速轻柔地放置于中央格,计时5min,开始观察并记录。每只小鼠测试结束后清理箱内粪便。观测指标包括:在中心区域活动的比例(%)、静止时间(s)、运动时间(s)、运动距离(cm)。

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1.2.4十字高架迷宫实验

十字高架迷宫实验检测小鼠的焦虑状态。观察小鼠5min内的自发活动,将小鼠头朝一侧封闭臂放于迷宫的中央区,计时5min,开始观察并记录。每只小鼠测试结束后清理粪便。观察指标包括:开放臂停留时间百分比(%)、封闭臂停留时间百分比(%)、中心区域停留时间(s)、运动距离(cm)、开臂探头次数。

高架十字迷宫,XR-XZ201,上海欣软,可定制

1.2.5结果与分析

实验数据采用SPSS23.0软件统计分析。计量资料采用x±s表示,呈正态分布且方差齐性者以One-WayANOVA检验比较组间差异,SNK法进行两两比较,方差不齐,采用Tamhane法进行两两比较,否则采用Kruskal WallisH检验,Nemenyi法进行两两比较。以P﹤0.05为差异有统计学意义。

2实验结果与分析

2.1制作熏香结果与分析

熏香制作实验采用以合欢花为主药(有效成分)随机加减配伍的方法,共筛选了39组熏香,以熏香的续燃程度、香味为筛选标准选出8组(分别为第9、24、28、32、34、37、38、39组)熏香进行实验,选品中药配伍比例结果见表1。

2.2旷场实验结果与分析

小鼠的空白组、沉香组、艾草组及8组熏香香熏后小鼠通过旷场实验的行为学观察小鼠的自发活动和探索行为,结果见表2:显示第28组和32组实验效果最优,小鼠焦虑程度较轻,运动时间、运动距离增加,在中心区域活动时间增长。

2.3高架十字迷宫实验结果与分析

小鼠的空白组、沉香组、艾草组及8组熏香香熏后小鼠通过旷场实验的行为学观察小鼠的自发活动和探索行为,结果显示第28组和32组熏香实验组效果显著,香茅草:合欢花:黄蜀葵:沉香:地榆粉之比分别为20:5:1:0:10和45:2:4:8:10,由此可见香茅草、地榆粉和合欢花对小白鼠焦虑有明显的治疗作用,能够减少小鼠的焦虑症状,高架十字迷宫实验表现为小鼠在开臂和中心区域停留时间增加,运动距离变长以及开臂探头次数增加;其次为第24组和34组熏香实验组,其余几组具有效果,但效果不显著,因此本实验筛选出第28组和32组熏香治疗小鼠焦虑安神效果显著。见表3。

4结论

本文通过不同中草药加减配伍的方法,制得39组熏香,最终选择了8组续燃时间与香味俱佳的熏香;并根据旷场实验和高架迷宫实验对小鼠的行为学进行探究,计算熏香对小鼠的焦虑治疗效果,分析其安神作用。

主要结论有:

(1) 通过不同中草药加减配伍的方法制得了8组续燃时间长,香味优的熏香,分别为第9、24、28、32、34、37、38、39组熏香。

(2) 通过旷场实验筛选了8组熏香对小鼠焦虑安神作用,结果显示第28组熏香对小鼠香熏后焦虑状态明显改变,其次为32组熏香,证明这两种熏香具有研究价值。

(3) 通过高架十字迷宫实验测了8组熏香对小鼠安神作用,结果显示筛选出第28组和32组小鼠焦虑程度明显降低,表现为小鼠在开臂和中心区域停留时间增加,运动距离变长,以及开臂探头次数增加。说明提高合欢花的比例可以增加香薰的镇静和抗焦虑的作用。

至于其他6组熏香,虽小鼠实验在某些实验数据上表现出不错的效果,但通过整体实验数据对比较不显著。本研究从生物学角度初步分析了中草药制熏香香料配比工艺,以合欢花为主药制熏香的合理性,能够为研究熏香制作原料和方法提供线索,同时能够为香薰作用于人体的安神作用提供参考。

文章来源:贵州中医药大学廖萌萌,沙宗阁,宓诗婷,张鑫源,陆丽青,付馨慧,姜珊珊等老师发表的《香茅合欢花等中草药制熏香对小鼠 的安神作用研究》。


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