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常规的WB和IHC检测结果不好怎么办?Fitzgerald多聚HRP标记抗体来帮忙

2021-05-27 16:24 作者:艾美捷  | 我要投稿

可能不少小伙伴都有这样的疑惑,“我的目的蛋白做WB没有条带或者条带特别淡,做IHC也没有阳性结果,尝试了不同稀释比的抗原,一抗,二抗,更换了不同厂家生产的抗体,结果还是不好,内参和其他蛋白都有正常的结果,why?”

 

这里你就要考虑一下,是不是目的蛋白本身的表达量就非常低,增加抗体浓度的作用也是非常有限的,zui终有小伙伴领悟了,然后又看到了相关文献,报道该目的蛋白在正常样本种表达量确实特别低,都到皮克级别了,难怪常规的WB和IHC检测结果不好...

 

于是接下来,他们试用了一种多聚HRP标记的二抗,成功检测到了阳性结果。到这里,你是不是要问,是什么好东西这么神奇?接下来我们展开说:

 

Poly HRP是一种增强信号的酶标记物,由共价辣根过氧化物酶(HRP)聚合物组成。目的蛋白的信号通过抗体传递给Poly HRP上携带的大量HRP分子,然后HRP分子作用于底物释放信号,使得目的蛋白检测信号得到放大,这些信号放大程度与HRP聚合范围成正比,从而可以利用多聚HRP在免疫分析中检测到低丰度蛋白(pg级别范围)。

 

链霉亲和素-poly HRP缀合物(SA-PolyHRP)由五个相同的HRP同聚物组成,同时与多个链霉亲和素分子共价偶联。目前生产过程中使用了三种不同的同聚物,它们分别是PolyHRP20、PolyHRP40和PolyHRP80。链霉亲和素-PolyHRP80比链霉亲和素-PolyHRP40灵敏度更高,链霉亲和素-PolyHRP40比链霉亲和素-PolyHRP20灵敏度更高。

不同尺寸HRP多聚体示意图

 

用链霉亲和素-PolyHRP技术检测技术标记非常简单,可以将它们结合到现有的测定系统中,现有的步骤,孵育间隔等几乎不需要改变。所需试剂基本上与使用标准链霉亲和素-HRP进行的常规ELISA相同。类似地,PolyHRP几乎可用于任何以HRP底物开发的检测系统(比色法、荧光法、包括化学发光),这也意味着与现有的ELISA和IHC仪器完全兼容。PolyHRP检测可能有利的其他分析方法包括高灵敏度DNA/RNA杂交分析和配体受体分析。

 

最后,小编给大家推一下艾美捷Fitzgerald的多聚HRP相关研究工具,包括链霉亲和素-polyHRP(Streptavidin Poly-HRP),polyHRP标记的各类二抗等等。

 

Fitzgerald成立于1989年, 总部位于美国马萨诸塞州的阿克顿(Acton),Acton是他们主要的销售团队,实验室以及分销中心的所在地。Fitzgerald还在全球范围内设有制造工厂,包括加利福尼亚,纽约,加拿大和爱尔兰。Fitzgerald是一家著名的一抗,二抗,重组和天然蛋白,ELISA试剂盒,血清和血浆以及其他生物试剂的供应商,是较早进入国内诊断市场的国际品牌之一,产品种类丰富,是体外诊断试剂生产企业的原料供应商。

 

作为Fitzgerald在中国的区域总代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的Fitzgerald产品。

更多产品详情请查看“文章来源”

 

文章来源:https://www.amyjet.com/featured/polyhrp.shtml




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