多肽合成知识分享之固相合成篇

一．如何合成多肽？

人工固相合成多肽一般是从序列的C端向N端逐个添加氨基酸。合生生物生物的多肽合成是基于PeptideSyn技术平台的Fmoc或Boc法的多肽合成（两种方法的合成步骤是相同的，只是α-氨基保护基 的脱除方式不同）。

这里以Fmoc保护策略法举例说明。合成由下列几个步骤组成：

①挂树脂：根据订单选用并称取相应量的树脂，投入反应器中溶胀备用。

②去保护：Fmoc保护的柱子和单体必须用20%piperidine去除氨基的保护基团。

③检测：检测是否已经把保护基去除，既是氨基是否已经裸露出来。（昂拓莱司生物常用茚三酮作为检测试剂，若结果是阳性，则判定氨基裸露）

④激活和交联：下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化。活化的单体与游离的氨基反应交联，形成肽键。我们需要注意的是氨基酸的投入量不是随意的。为保证肽链合成的准确性；氨基酸，缩合剂以及碱是有一个比例的。这里提供一个参考比例。（规模（mol）：氨基酸：缩合剂：碱=1:3:3:6）

⑤检测：检测是否已经把所需氨基酸连上。结果是阴性，判定氨基酸已经完全连上。

⑥循环：反复循环②-⑤直到合成完成。

⑦将合成的肽从树脂切割和去保护。（Fmoc策略用TFA（强酸）即可将多肽从树脂上切下。）

固相合成肽链，为减少副反应的发生，选用的部分氨基酸的侧链是用保护基团保护起来。但最终的成品只要肽链，既需要脱除保护基。一般为了方便操作，根据肽链上的不同保护基预先配好切割液。（在这里用合生生物生物常用的其中一种切割液配比举例说明。E液配比：87.5%TFA+5%茴香硫醚+2.5%纯水+2.5%苯酚+2.5%EDT）

⑧使用冰乙醚离心沉淀（至少要洗三遍）；洗脱、冷冻干燥。得出粗品进行MS检测和HPLC检测。

二。能够合成的多肽的最大长度是多少？

人工合成多肽时，因为不可避免地会出现各种副反应；肽链 越 长 反应循环次数多，副反应就会 越 多，其目标肽的回收率就 越 低。在不考虑氨基酸结构，极性等影响时，肽链长度太长会使合成难度加大。

一般是对多肽进行HPLC和MS检测。多肽一般采用反相色谱法纯化。以质谱法测定肽的分子量来确定产品是否正确，MS检测结果还可显示大部分的主要杂质。还可进行净含量检测，如氨基酸分析或元素分析。这些方法可以证实多肽的氨基酸组成，他们均可作为多肽确认的补充方法。合生生物生物对客户提供的检测。所有材料均严格保密。在发送产品时，同时免费提供HPLC和MS检测结果。如果客户有需求，还可提供肽净含量

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