FITC-NHS；绿色荧光素标记活性脂；FITC-活化酯/N-羟基琥珀酰亚胺

2023-05-18 09:14 作者:齐岳创科 0人读过 | 我要投稿

FITC标记蛋白方法：

（1）将待交联的蛋白（浓度≥1mg/mL）对交联反应液透析三次4℃，至pH=9.0。交联反应液配制方法：7.6gNaHCO3，1.06gNa2CO3，7.36gNaCl，加水定容至1L。

（2）将FITC溶于DMSO中，浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制，避光。

（3）按P:F（蛋白质：FITC）=1mg:150μg的比例将FITC缓慢加入于抗体溶液中，边加边轻轻晃动使其与抗体混合均匀，暗处4℃反应8h。

（4）加入5mol/L的NH4CL至终浓度50mmol/L，4℃终止反应2h。

（5）将交联物在PBS中透析四次以上，至透析液清亮。

（6）交联物的鉴定

蛋白浓度（mg/mL）=[A280-0.31×A495]/1.4

F/P比例：3.1×A495/[A280-0.31×A495]，该值应介于2.5～6.5之间。

（7）FITC交联的蛋白应置于Ph7.4的磷酸盐缓冲液中，加入0.1%NaN3、1%BSA,4℃避光保存。

FITC异硫氰酸荧光素是一种黄色粉末状的荧光染料，激发波长为494 nm左右，具有高吸收率、优良的荧光量子产率和良好的水溶性等特点。

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