RACE - cDNA末端快速扩增

RACE： rapid amplification of cDNA  ends     cDNA末端快速扩增

RACE是一种快速扩增cDNA的5'端或3'端序列的技术

RACE有关实验大致流程：

RACE可分为5'RACE和3'RACE,5'RACE和3'RACE是针对mRNA而言的

为获取mRNA5'端序列的RACE称为5'RACE  ;为获取mRNA3'端序列的RACE称为3'RACE

5'RACE  

注：TdT: terminal deoxynucleotidyl transferse       末端脱氧核糖核酸转移酶  

这是一种在DNA3’端添加核苷酸的酶，简称末端转移酶 ,与DNA聚合酶不同的是,其催化的聚合反应不需要模板指导，dNTP任何一种都可做为它的底物，可以形成同聚物尾巴，如下图的poly(dC)

以此同聚物尾巴为随机引物，与基因特异引物一起PCR，就可完成5‘端序列的扩增。

总流程示意图：

3'RACE

3'RACE的原理基本上等同于RT-PCR。

以oligo(dT)为引物，将mRNA反转录成cDNA,以该cDNA为模板，以基因特异性引物和oligo(dT)为引物进行PCR。

由于oligo(dT)特异性较低，因此，反转录时常在oligo(dT)引物5’端添加一些附加碱基，以此附加序列及基因特异序列设计引物进行PCR。

总结