PCR高考考点题型专题【选必三】|考点精华
喵喵 | 3-7 PCR及电泳考点专题
1️⃣PCR过程基础题
2022·辽宁
抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提供依据，采用PCR方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。下列叙述正确的是
A. 预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制【先解旋，再复制】
B. 后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分✓
C. 延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制
D. 转基因品种经检测含有目的基因后即可上市【稳定的表达+有生物活性】
2021春·红桥区期末
关于PCR反应体系中所加物质作用的描述，不正确的是
A. 耐高温的 DNA聚合酶用于催化 DNA子链的合成
B. 引物使Taq酶能从引物的3′端延伸 DNA链
C. 目标 DNA母链用作合成DNA复制的模板
D. 解旋酶用于打开DNA双链【体外用热高温变形】
2️⃣PCR引物题
习题3
某基因的上游有2段DNA序列，利用PCR技术进行基因扩增时，可以作为引物的是
【引物不能自己互补，引物和引物之间不能互补】
A. 引物I✓
B. 引物Ⅱ
C. 引物Ⅰ或引物I均可
D. 引物I和引物Ⅱ都需要
2023·海口一模
为探究AtCA2ox8其因在拟南芥中的生物学功能，研究者采用PCR技术从拟南芥基因组中扩增得到了该基因，并采用农杆菌转化法将该基因导入拟南芥细胞中，得到了AtGA2ox8基因高表达的纯合转基因拟南芥植株，该植株表现为发育迟缓。下列相关叙述错误的是
A. 利用PCR扩增AtGA2ox8基因时，循环n次需要消耗引物2ⁿ个【2ⁿ⁺¹-2个】
B. 将AtGA2ox8基因导入受体细胞前需要先构建基因表达载体
C. 利用农杆菌转化法培育转基因拟南芥的过程中至少要进行两次筛选【第一次是重组质粒是否进入细胞；第二部是T-DNA分子有没有带者基因转移到细胞的基因组中】
D. 若AtGA2ox8基因的序列已知，还可通过人工合成的方法获取该基因
3️⃣PCR扩增产物电泳图题
2022·湖北
为了分析某21三体综合征患儿的病因，对该患儿及其父母的21号染色体上的A基因（A1～A4）进行PCR扩增，经凝胶电泳后，结果如图所示。关于该患儿致病的原因叙述错误的是
A. 考虑同源染色体互换，可能是卵原细胞减数第一次分裂21号染色体分离异常
B. 考虑同源染色体互换，可能是卵原细胞减数第二次分裂21号染色体分离异常
C. 不考虑同源染色体互换，可能是卵原细胞减数第一次分裂21号染色体分离异常
D. 不考虑同源染色体互换，可能是卵原细胞减数第二次分裂21号染色体分离异常【A2A2或A3A3】
2023·潍坊二模
下列关于DNA片段的扩增及电泳鉴定的相关说法，正确的是
A. PCR反应缓冲液中一般要添加ATP，以激活耐高温的DNA聚合酶【激活用Mg²⁺】
B. PCR反应中设置不同的温度是为了使DNA聚合酶催化不同的反应【高温变性、低温复性、中温延伸】
C. DNA分子在凝胶中的迁移速率只与DNA分子大小和构象有关【还跟浓度、电荷有关】
D. 凝胶中的DNA分子通过染色，可以在一定波长的紫外灯下被检测出来✓
2023·永州三模
甲型流感病毒的抗原性与感染性与其表面的R蛋白（血凝素蛋白）密切相关，现利用基因工程的方法生产相关疫苗。图甲为构建R蛋白基因表达载体的过程，图乙为重组质粒被相关酶切后的电泳结果。下列相关叙述错误的是
A. 电泳技术可以用于人类亲子鉴定、生物间亲缘关系的鉴定
B. 图甲过程中至少需要应用到逆转录酶、DNA聚合酶、限制酶、DNA连接酶
C. 通过PCR技术从1个cDNA分子中特异性扩增出R蛋白基因，要得到24个不含黏性末端的R蛋白基因至少需要5次循环【22个】
D. 构建好的重组质粒长度共2000bp，据图乙可推测BamHⅠ在重组质粒上有3个酶切位点
4️⃣PCR进阶综合
2020春·西城区期末
水稻R基因的等位基因RI与Rz存在一个碱基对的差异，为检测水稻的基因型,使用存在1个碱基错配的引物对3株水稻的R基因局部进行PCR扩增后，用限制酶HinfⅠ切割并电泳（如图）。下列相关叙述错误的是
A. 在R₁基因和R₂基因的差异序列中，不含限制酶HinfⅠ的酶切位点
B. 引物中存在1个碱基错配，导致R基因经PCR扩增后1个碱基对改变
C. 扩增后的R₂片段有1个Hinf Ⅰ的酶切位点，而扩增后的R₁片段没有
D. 电泳结果显示，植株1为纯合子，植株2和植株3为杂合子【植株2是纯合子】
2022·乙卷
新冠疫情出现后，病毒核酸检测和疫苗接种在疫情防控中发挥了重要作用。回答下列问题。
（1）新冠病毒是一种RNA病毒，检测新冠病毒RNA（核酸检测）可以采取RT – PCR法。这种方法的基本原理是先以病毒RNA为模板合成cDNA，这一过程需要的酶是逆转录酶，再通过PCR技术扩增相应的DNA片段。根据检测结果判断被检测者是否感染新冠病毒。
（2）为了确保新冠病毒核酸检测的准确性，在设计PCR引物时必须依据新冠病毒RNA中的特异性核苷酸序列来进行。PCR过程每次循环分为3步，其中温度最低的一步是复性。
2023·浙江
（5）用PCR技术鉴定再生植株。已知甲植物细胞核具有特异性DNA序列a，乙植物细胞质具有特异性DNA序列b；M₁、M₂为序列a的特异性引物，N₁、N₂为序列b的特异性引物。完善实验思路：
Ⅰ. 提取纯化再生植株的总DNA，作为PCR扩增的模板。
Ⅱ. 将DNA提取物加入PCR反应体系，M₁、M₂为特异性引物，扩增序列a；用同样的方法扩增序列b。
Ⅲ. 得到的2个PCR扩增产物经凝胶电泳后，若每个PCR扩增产物在凝胶中均出现了预期的1个条带，则可初步确定再生植株来自于杂种细胞。
2023·长春模拟
阅读资料1、资料2，回答下列问题。
【资料2】新冠病毒核酸测序能够监测新变异毒株的出现，具体做法是：先提取新冠病毒RNA，利用RT -PCR技术（即将病毒RNA逆转录后再进行PCR扩增）获取目标DNA区域;随后进行DNA测序，通常采用双脱氧核苷酸测序法，其原理是：双脱氧核苷酸（ddNTP）的2'、3'碳原子都不含羟基，在DNA合成过程中不能形成磷酸二酯键，因此可以中断DNA分子合成反应。在四个单独的PCR反应体系中，分别额外掺入ddATP、ddTTP、ddGTP、ddCTP，使DNA复制随机终止，产生不同长度的DNA片段，然后进行凝胶电泳分离检测，从而分析获得目标DNA区域的碱基序列。
（3）资料2，RT - PCR技术中使用的酶有逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶。
PCR反应中的每次循环可分为变性、复性、延伸三步，其中复性的结果是两种引物通过碱基互补配对，与两条单链DNA延伸。
（4）如图为资料2中双脱氧核苷酸测序电泳结果，据此可分析出目标DNA区域X的碱基序列为5'—CTGACTT—3'（按5'→3'方向书写）。
2022·天津
研究者拟构建高效筛选系统，将改进的苯丙氨酸合成关键酶基因P1导入谷氨酸棒杆菌，以提高苯丙氨酸产量。
（1）如图是该高效筛选系统载体的构建过程。载体1中含有KanR（卡那霉素抗性基因）和SacB两个标记基因，为去除筛选效率较低的SacB，应选择引物1和4，并在引物的5'端引入Xho Ⅰ酶识别序列，进行PCR扩增，产物经酶切、连接后环化成载体2。
（2）PCR扩增载体3中筛选效率较高的标记基因RpsL(链霉素敏感基因)时，引物应包含Xho 1酶识别序列，产物经单酶切后连接到载体2构建高效筛选载体4。
