如何计算转染效率

计算转染效率的方法有哪些

使用不同类型的方法来计算转染效率。

1. 报告系统

– 绿色荧光蛋白 （GFP） – GFP 天然存在于水母中。它用于通过同时转染GFP基因和目的基因对转染细胞进行定性和定量分析。定性分析可以在荧光显微镜下进行。定量分析可以通过流式细胞术完成。除GFP外，红色荧光蛋白（RFP）和黄色荧光蛋白（YFP）也可用作报告基因。表达荧光蛋白的大肠杆菌菌落如图1所示。

图1：荧光蛋白

• 荧光素酶 – 荧光素酶天然存在于萤火虫中，产生光。荧光素酶测定具有很高的灵敏度，可用于转染DNA的定量分析。

• β-半乳糖苷酶 – β-半乳糖苷酶存在于大肠杆菌中。它用于用X-gal进行的定性分析以及通过比色，荧光或化学发光方法进行的定量分析。

• 分泌的碱性磷酸酶（SEAP） – SEAP是一种热稳定报告基因，在表达时由哺乳动物细胞分泌。

2. 核酸标记 – 荧光标记的质粒可用于转染。然后可以在荧光显微镜下对它们进行计数。

3. 蛋白质印迹、免疫染色和其他功能测定

如何计算转染效率

显示报告基因的细胞数量和不显示报告基因的细胞数量可以在显微镜下或通过流式细胞术计数。显示报告基因的细胞百分比给出了转染效率。

图2：转染效率