胶原蛋白/乳铁蛋白/玉米蛋白/肌动蛋白标记荧光染料FITC/cy3/5/7/RB
FITC，英文全称Fluorescein Isothiocyanate，中文名称异硫氰酸荧光素，具有高吸收率、优良的荧光量子产率和良好的水溶性等特点，是生物学中应用广泛的一种绿色荧光素衍生物，其异硫氰酸基团可与蛋白的氨基末端或者伯胺反应从而实现包括抗体，凝集素在内的蛋白标记。除了用作蛋白质标记物，还可用作蛋白质荧光示踪剂，标记抗体用以快速鉴定病原体，以及用于蛋白质和多肽（HPLC）的微量测序。FITC为黄-橙色粉末，激发波长为494 nm。一旦激发，在发射波长520 nm处呈黄-绿色荧光。
FITC有两种异构体，异构体I（Isomer I）和异构体II（Isomer II）,二者在光谱性质上基本没有差异（无论是波长还是光强度），但是前者更易纯化，所以相对便宜，应用也较为广泛。对于大部分应用，混合型的FITC已能很好的满足实验要求。本品Isomer I含量≥90%，适合用于蛋白质标记。
标记蛋白
1）制备溶于0.1 M碳酸钠缓冲液（pH 9）的待交联蛋白样品，浓度≥2 mg/mL。
2）溶解FITC于无水DMSO配制成浓度为1 mg/mL的溶液。
3）对于1 mL 蛋白溶液加入50 µLFITC溶液，可按照每次5 µL的量边加边轻轻搅拌蛋白溶液；
4）待所需FITC加入完毕，将反应液于4℃避光孵育8 h；
5）加入NH4Cl使其终浓度至50 mM，4℃终止反应2 h；
6）加入二甲苯青至浓度0.1%，甘油至浓度5%；
7）通过大小孔径合适的凝胶过滤层析分离排除未被结合的FITC，分离范围在20，000至50，000（球蛋白例如抗体）。待凝胶柱平衡后，将以上反应混合液从柱顶注入，打开凝胶柱，待其全部流入柱床后，加入PBS缓冲液。
8）于4℃避光储存上述偶联物，加入0.1%（w/v）叠氮化钠作为一种防腐剂。若蛋白浓度较低（＜1 mg/mL），可加入1%BSA作为一种蛋白稳定剂。
9）偶联物中荧光素和蛋白的比值（F/P）可通过测定495 nm和280 nm处的吸光值来鉴定，F/P应位于0.3-1.0。小于该比例则信号太低，高于该比例则背景太高。
我们可以提供以下荧光染料标记蛋白：荧光素FITC、罗丹明、辣根酶HRP、生物素Biotin、Cy7、Cy5、Cy3、Cy5.5、ICG吲哚菁绿标记酪蛋白Casein、双花扁豆凝集素(DBA)、美洲商陆凝集素(PWM)、麦胚凝集素WGA、大豆凝集素（SBA）、花生凝集素Peanut Agglutinin(PNA)、泛素（Ub）、相思子毒素（AT）、链霉亲和素Streptavidin（SA）、亲和素Avidin、蛋白A（Protein A）、重组蛋白G、刀豆球蛋白A(Con A)、蓖麻毒素Ricin Toxin(RT)、胰岛素Insulin(Ins)、人转铁蛋白Transferrin、人血清白蛋白HSA、牛血清白蛋白BSA、鸡卵白蛋白OVA.
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QY小编zyl2022.11.30
