Thyl 系膜增生性肾炎动物模型【北京实验代做】

Thyl 系膜增生性肾炎动物模型【北京实验代做】

【造模机制】 Thy1 抗原是大鼠胸腺细胞分化抗原,利用大鼠胸腺细胞作为抗原免疫家兔制备的免抗大鼠的 Thyl 抗血清(ATS)可直接与系膜细胞表面抗原结合、固定补体形成膜攻击复合体使细胞溶解,继而引起残存的系膜细胞增生,并经几次攻击后,系膜细胞增生且能较长时间持续,诱发成 Thy1 系膜增生性肾炎模型。

【造模方法】

1、动物和免疫细胞大鼠胸腺细胞悬液制备:低龄 SD 大鼠1 只,麻醉后取胸腺,剪碎并挤出胸腺细胞,经尼龙网过滤除去混杂的组织,滤液为淋巴细胞悬液,离心,无菌 PBS悬浮,计数悬液中淋巴细胞数,调细胞密度至 10"L。

2.免疫血清和效价测定雄性 NZW 兔,卡介苗预致敏,14 天后两侧腘窝淋巴结肿大。注射抗原(胸腺细胞十弗氏完全佐剂),3 周后同样途径再次免疫,2 周后经耳缘静脉第 3次免疫,1 周测效价,满意后颈动脉放血,收集血清,经 56℃,30 分钟灭活补体,大鼠肝粉吸附,备用。ATS组织效价测定:用正常低龄大鼠胸腺冷冻片,ATS稀释度1：20～1；640,PAP法免疫组化测定效价。正常兔血清(1：40)对照。

3.大鼠 Thyi 肾炎模型的制作雄性 SD大鼠 150g左右,实验组(n=45),尾静脉注射ATS,每周 1 次,连续 4 周。对照组(n=10)。分别于 1 天、3 天、5 天、7 天、2 周、3 周、4 周和5 周处死动物,取肾脏做相应检查。普通 HE 染色,计数 20 个肾小球内细胞数,取均值。免疫组化 ABC 法作 PCNA(华美公司)、&平滑肌肌动蛋白(a-SMA,Dako)染色。计数 20 个肾小球内 PCNA 阳性数,取均值;a-SMA 采用 Floege 半定量法,计数 20 个肾小球内积分,取均值。

【模型特点】

1.连续 4 次注射兔抗大鼠 Thyl 抗血清(ATS),4 周即可成功地建立 Thyl 系膜增生性肾炎模型。

2.病变明显,系膜基质增多显著,病变肾小球体积增大,第 1 天系膜溶解,肾小球数明显减少,第 3 天细胞开始增生,第 7 天显著增加,第 3 周细胞数由正常 54.03±2.08 增加到100.50±9.85,并可维持到第 5 周。

3.应用 PCNA、G-SMA 作为增殖指标观察系膜细胞的增生情况,结果显示改进型动物模型在病变诱导的 28 天、35 天时,表达 PCNA,a-SMA 的阳性细胞仍较多,较正常动物组,细胞增生明显(P<0.05)且病变持续时间较长。

【应用范围】深入研究以系膜增生为主要特征的肾炎的发病机制,并探讨其防治措施。目前该模型已应用于中药药效学及临床治疗研究。

【注意事项】

1. ATS 必须连续 4 次注射单次注射 ATS 引起的肾炎,在病变的第14 天已很少测出PCNA 和 a-SMA 的阳性细胞,第 21 天时已不表达。

2. ATS 单次注射后 3 天、5 天系膜增生明显,但以后逐渐缓解,故 Thy1 肾炎是一个自限性的系膜增生肾炎。为了使该模型病变明显且能较长时间持续存在,应在首次注射 ATS后,每周一次,连续注射 4 周。

【模型评估】肾小球系膜细胞增生以及系膜基质增多是多种类型的肾炎常见而又突出的病理变化,往往也是肾小球硬化早期阶段的表达。该模型肾炎病变明显,系膜细胞增生显著且持续存在,系膜细胞 α-SMA 持续阳性,表明系膜细胞一直处于活化增殖阶段,病变持续活动,更符合临床上所见到的人类的系膜增生性肾炎。该模型在原模型基础上进行了改良,增加弗氏完全佐剂增强免疫,缩短造模时间,症状典型,是目前国内外公认的系膜增殖性肾炎模型。

文章转载于北京吉田生物科技有限公司