Day4——柚皮素靶向巨噬细胞TFEB-14-3-3 epsilon界面抑制腹主动脉瘤
这次读的是一篇药理+结构的，大老板依然是孔炜。
CMap系统：基于全基因组表达谱的数据驱动和系统的方法发现基因、化学物质与疾病的关联。相似的药物可能具有相似的机制，治疗相似的疾病。
Result1：Naringenin is a candidate compound for the treatment of AAA
将已整合入CMap的化合物进行与强力霉素的相关性排序，在前十种中，天然存在的葡萄柚类黄酮柚皮素(NGN)与强力霉素呈显著相关，并已被证实具有降脂、抗动脉粥样硬化、抗高血压和抗炎特性。考虑到高血压、动脉粥样硬化和血管炎症在AAA28发病机制中的重要作用，假设柚皮素可能抑制AAA的形成。
对橘皮素抑制AAA的效果进行了简单的验证。分别是CaPO4和AngII的模型。
Result2：Naringenin reverses established AAAs
先建立AAA，然后再处理，为了判断NGN会不会逆转已建立的AAA
超声测量的肾上主动脉直径被柚皮素强烈抑制。离体测量肾上主动脉最大直径显示，21只柚皮素处理小鼠中只有10只仍存在AAAs;其他小鼠的AAAs明显减少。
在CaPO4模型里又进行了验证。
这一部分表明，柚皮素不仅可以阻止AAAs的形成，还可以延缓已形成的AAAs的进展。
Result3：Naringeninactivates TFEB and lysosome biogenesis in macrophages
基因本体分析显示，橘皮素反应性基因中，上调的基因多与溶酶体相关。
在巨噬细胞中，橘皮素可以剂量依赖性地增加溶酶体的数量和降解能力。
RT-qPCR显示，上调的溶酶体基因包括溶酶体膜蛋白(ATP6V1A等)和溶酶体酶(CTSB、CTSD等)
柚皮素增加了巨噬细胞中LAMP1(溶酶体数量的标志)，但降低了p62(自溶酶体降解活性的标志)水平，这两者共同表明诱导了自溶酶体的形成和降解。与这些发现一致，柚皮素促进了自溶酶体的形成，mRFP-GFP串联荧光标记LC3 (tfLC3)实验证明了这一点。因此，柚皮素可以促进溶酶体的生物发生和活性。
接下来评估在体内的效果。
橘皮素能增加AAA巨噬细胞中溶酶体数量。
在早期(7天)注入血管的ApoE−/−小鼠的腹腔巨噬细胞中也观察到溶酶体数量(通过LAMP1表达检测)和活性(通过p62降解检测)的减少，但这些参数通过柚皮素灌胃恢复。
溶酶体生物发生的调控由MiTF/TFE转录因子家族(MiTF、TFEB、TFE3和TFEC)和抑制因子zkscan33,34调控。
橘皮素可以剂量依赖性地上升TFEB的表达，但不影响TFE3表达。
磷酸化的TFEB与14-3-3蛋白相互作用，在细胞质中保持无活性的状态。在营养和能量应激的情况下，TFEB被钙调蛋白激酶去磷酸化，转位至细胞核，上调靶基因的表达，包括TFEB本身。
橘皮素可时间依赖性地促进TFEB的核易位，而降低胞质中的TFEB。但是橘皮素并没有改变AKT和PKC的磷酸化水平，表面橘皮素对TFEB活化的影响并不依赖于AKT和PKC。
在体内，TFEB能强烈上调AAA巨噬细胞中TFEB水平。
因此，柚皮素在体内外均能刺激巨噬细胞中TFEB的表达/激活和溶酶体的生物生成。
Result4：Naringenin inhibits and reverses AAA via macrophage TFEB
建立TFEB条件性敲除小鼠，对照组中NGN有治疗效果，而敲除TFEB之后不再有治疗效果。
接下来又是前面一部分的思路——AAA的建立与建立后的延缓作用。
这一部分实质上是对前面结论的双向验证。柚皮素对已建立的AAAs的保护作用依赖于巨噬细胞TFEB。
Result5：Naringenin directly binds to 14-3-3 epsilon and inhibits the TFEB-14-3-3 interaction
筛选出14-3-3蛋白，为了确认结合，进行等温滴定量热法(ITC)、细胞热移实验(CETSA)、等温剂量-反应指纹图谱(ITDRFCETSA)
免疫共沉淀表明，柚皮素显著抑制了TFEB和14-3-3ε的相互作用，但不抑制FOXO4（一种14-3-3ε已知配体）的结合。
Result6：Naringenin ameliorates AAA via TFEB-dependent inhibition of the NLRP3 inflammasome
柚皮素刺激或TFEB过表达抑制了血管内皮素诱导的巨噬细胞NLRP3炎性体的激活。应用氯喹抑制溶酶体酸化消除了柚皮素对caspase-1激活和IL-1β分泌的抑制作用。
体外成熟caspase-1的western blotting分析和体内血浆IL-1β的ELISA分析证明，TFEB敲除显著阻断柚皮素的作用。
这一部分表明，柚皮素和TFEB至少部分通过溶酶体依赖性抑制NLRP3炎性体来减弱AAA的形成。
Result6：Naringenin promotes TFEB-dependent macrophage M2 polarization
用一张图总结一下，柚皮素与14-3-3结合后，释放TFEB，TFEB入核，抑制NLRP3炎症激活，诱导M2巨噬细胞极化，导致腹主动脉瘤的发生发展。
其实这篇读的并不细，尤其是结构部分几乎没看，有时间的原因，更多的是看不懂。。。
接下来的日子可能读结构比较多了。又或许还是心血管。。。
明天先看看吧qwq
