M13噬菌体-重组DNA技术

M13 噬菌体是一种细菌病毒，由被各种主要和次要外壳蛋白包裹的单链 DNA 组成。 M-13 的基因组仅比 λ 载体小 6407 个核苷酸。

1. 为丝状相，由单链环状DNA分子组成。 M-13的基因组仅比λ载体小6407个核苷酸，这是因为M-13噬菌体的衣壳蛋白仅由三个基因的多拷贝编码，而λ噬菌体的衣壳由超过15种蛋白质合成构成λ向量的头尾结构。

2. M13的单链DNA称为+链。 在大肠杆菌细胞中，它通过利用大肠杆菌机制转化为称为复制形式 (RF) 的双链 DNA。

3. 该载体复制后释放宿主细胞，无需细胞裂解

4. M13病毒的生命周期比λ载体简单得多，M13病毒通过菌毛进入细菌宿主。 该 DNA 分子充当合成新 DNA 链的模板。 DNA 的互补链形成，导致双链 DNA 的形成。 但是DNA分子并没有整合到细菌宿主染色体中。 这样复制直到宿主细胞中存在 100 个拷贝。 如果是宿主细胞，则每个子细胞都会收到 M13 噬菌体 DNA 分子的拷贝。 这些噬菌体 DNA 分子继续分裂以维持每个细胞的拷贝数。 由于DNA分子以单链形式释放，这些噬菌体颗粒不断组装并从宿主细胞中释放出来，宿主细胞不会裂解，因此M13噬菌体分子可专门用于扩增那些需要测序的DNA分子。

5. M13噬菌体的衣壳限制了可以与噬菌体分子连接的外源DNA的大小。 在衣壳中正确包装 DNA 分子的合适大小为 38 至 51 kb 长。 因此，大约 2.5 kb 的外源 DNA 可以被 M13 噬菌体克隆。 这种限制可以通过使用宿主的必需基因构建载体并接受外源 DNA 到其理论最大值来克服。

M-13载体的使用

• DNA测序

• 诱变研究

• 探针生成

• 探头展示