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色谱柱常见问题汇总(六)

2023-04-11 16:25 作者:铄思百-add  | 我要投稿

一.HPLC柱前衍生和柱后衍生的相关问题?1)为什么要衍生?2)衍生化的分类?3)进行衍生,适用的化合物有哪些?4)进行衍生化的要求有哪些?5)柱前衍生和柱后衍生的优缺点?

       答:色谱技术中的化学衍生法系指在色谱过程中用特殊的化学试剂(一般称为衍生化试剂或标记试剂)使样品成分转变相应的衍生物之后进行分离检测或进行检测的方法。目的为:1.将紫外—可见强吸收功能基团引入被检测对象或将其转变为荧光衍生物,以提高检测灵敏度;2提高对分析样品的分离和选择性。

       从是否与HPLC系统联机的角度,化学衍生法分为在线on line)与离线∣Off line)两种。从发生衍生化的场合,分为柱前衍生法pre-columnderivatization)与柱后衍生法(post-columnderivatization)两种。目前,在HPLC中,以离线的柱前衍生法(简称柱前衍生法)与在线的柱后衍生法(简称柱后衍生法)使用居多。

二.多个样品不好不离的时候,请问该怎么通过选择合适的柱子来提高分离度?

       答:提高分离度可从三个主要影响因素来考虑,柱效、选择性和保留因子。可通过减小填料粒径和增加柱长提高柱效;选择性和固定相选择以及pH条件有关,通过选择合适的色谱柱和合适的pH,可以提高选择性;有时候适当延长出峰时间增加保留因子,也可提高分离度。

三.苯基柱,氰基柱该什么时候考虑用?

       答:苯基柱用于含苯环的芳香族化合物的测定时,具有较高的选择性。CN柱可作为一个保留能力最弱的反相柱使用,也可作为一个活性降低的正相柱使用(保留时间比硅胶柱和氨基柱低很多)。

四.同样类型柱子还有长度,粒径等差异,这些该怎么去选择?

       答:长度和粒径都是用来改变柱效的,选择原则是够用就好。

五.我前几天刚刚装上一个新的C18柱,在进样之前我用100%的甲醇冲了半个多小时。刚才看到上面写的要活化什么的?不知道我只冲洗半小时就开始用对柱子有没有影响?对出峰什么的有没有影响呢?

       答:不是所有的测定,都需要对新柱子用所测样品老化。但先按方法程序进样几针,观察到峰面积保留时间不再有明显变化,再开始正式测定,这是一个好习惯。按你现在的做法,如果第一针和第二针的峰面积、保留时间没有变化,就继续做没影响吧。

总结

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