如何测定蛋白质的一级结构
蛋白质的一级结构,又称初级结构,是指蛋白质的氨基酸排列顺序以及二硫键的位置和数量。蛋白质的一级结构是形成高级结构的基础,一级结构的测定在一定程度上也有助于高级结构的预测。
常用的蛋白质一级结构测定方法包括蛋白质测序法、DNA测序法以及质谱测序法等。蛋白质测序法以C端/N端测序为主,主要对蛋白质两端的氨基酸序列进行测定。DNA测序法根据已经测定的部分氨基酸序列设计引物,扩增出其mRNA,从而推断蛋白质的全部氨基酸序列。质谱法将已知分子质量的、纯化后的蛋白酶解为小片段多肽并进行序列分析,根据小肽段之间的重叠区确定小肽段的排列顺序,依此推演整条多肽链的氨基酸序列。
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