色谱柱常见问题汇总（十九）

一.我是做农药残留分析的，不同的基质杂质含海量是不同的，我用C18分析时有可能一次就污染了，我用高流速，和反向冲洗都解决不了，是不是这根柱子就废了，有没有其他的办法？

       答：高流速反向冲洗是对的，关键你用了什么溶剂冲洗呢？用原来的流动相冲洗肯定不管用，要不然就不会累积在柱子上了。你应该用流动相中的强溶剂B冲洗，如果不行，就需要启用再生的程序，当然再生时用的溶剂更强。

       100％甲醇---100％乙晴---75％乙晴/25％异丙醇---100％异丙醇---100％二氯甲烷---100％正己烷。用每种溶剂冲洗至少10个柱体积，对于250mm×4.6mm的分析柱，合适的冲洗流速是1～2ml/min。最后用10柱体积的异丙醇过渡，然后回到原来的流动相体系。

       再生还不解决问题，最后一招就是挖补柱头填料，把柱头污染的填料挖掉，用干净填料填补进去。挖补填料，破坏原有柱床结构，挖补后柱效也不可能有新柱水平，或许能再维持一段时间，但不会长久。

二.还有溶剂中的金属过滤头生锈了，会有什么影响？会不会影响到柱子的寿命，金属离子和柱子有没有什么反应？

       答：我觉得你就把锈当成颗粒物污染的一种，会导致拖尾、柱压上升等。溶解的金属离子一般在反相柱上没有什么保留能力，马上就会被冲出柱子，不会和固定相或者和硅胶基质反应。

三.如果在溶剂过滤时把水膜当成有机膜了溶解了而且这样的溶剂又做有机相用了，造成C18柱压由1000升到3000，流动相是乙腈和水，问一下这样的柱子还能用么？有没有什么补救方法？

       答：溶解的膜作为了颗粒物堵塞筛板，引起柱压上升，也只有反冲一下，如果能把堵在筛板上的膜残渣冲走，柱压下降了就OK了；如果残渣进入了柱子内部的填料间隙，会难冲一点，也只能多冲一会吧，实在不行，你又舍不得把色谱柱报废，就只有挖补柱头填料和换筛板了。

四.保护柱和预柱的作用是不是一样的，如果不一样有什么区别么？保留时间漂移多少为可以接受的范围？

       答：保护柱一般带填料，相当于一根缩短了的色谱柱（一般是1-2cm长度），卡套里可更换的柱芯，柱管、筛板和填料都有。保护柱里的柱芯好像是在前面开路的扫雷部队，流动相和样品里如有什么损害柱子的污染物，保护柱就自己承受了下来。

       而预柱，现在一般指的就是接在进样器和色谱柱之前的在线过滤器。在线过滤器和保护柱的最大区别是不带填料，只有可更换的筛板。预柱只能保护色谱柱免受颗粒物质的污染，而不能阻挡溶解在流动相中的强保留物质。

       保留时间是液相色谱中一个很有用的诊断分离问题的工具。保留时间受流动相组成、温度、pH、流速、固定相流失和柱老化等很多因素的影响，如果所有这些参数保持不变，保留时间也保持恒定。但在实际操作中，不可能对每个色谱参数进行很完美的控制，如即便加了柱温箱，温度还是会有波动；流动相组成会因组分挥发性不同而改变。

       所以保留时间有上下0.02-0.05min的变动是非常正常的，对某些方法有0.1min上下变动也属正常。保留时间有大的变化，预示着系统和方法存在问题。流路里有气泡存在，泵阀有泄漏，会因流量降低而导致保留时间增加。梯度混合比例阀故障也是保留时间变化原因之一。

总结

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