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罗丹明B标记链霉亲和素,关于罗丹明B可用于荧光探针的制备

2023-09-27 15:18 作者:瑞禧生物08  | 我要投稿

罗丹明B标记链霉亲和素,关于罗丹明B可用于荧光探针的制备

今天小编整理并分享关于罗丹明B可用于荧光探针的制备:

罗丹明B常用于蛋白标记,例如罗丹明B标记链霉亲和素,荧光标记的生物分子可广泛用于生命科学研究和疾病诊断领域。相关文献提到:

通过Stober方法将罗丹明B分子通过共价结合的方式成功地包覆在二氧化硅纳米粒子中,制备的荧光硅纳米粒子具有很好的水溶性、成像稳定性以及生物兼容性,其粒子大小约为60nm。荧光强度和罗丹明B分子相比提高了4000倍。对制备的荧光硅纳米粒子进一步进行了氨基、羧基及链霉亲和素的修饰,成功研制了可特异性结合生物素修饰蛋白质的纳米荧光检测探针。

制备过程:

荧光硅纳米粒子依据Stober法制备:

 

50 mL的圆底烧瓶用8%的氢氟酸浸泡30 min,用洗涤液洗涤,自来水冲洗,二次水荡洗,烘干,干燥器中冷却;圆底烧瓶中加入溶解了RITC (5.36 mg,0.01 mol)以及APTS (13.6 uL,0.08 mmol)的绝对乙醇(800 uL)并搅拌反应。20 h后氨水(25%,2 mL)与30 mL乙醇加入到混合液中室温下搅拌。20 h后加入 TEOS (0.558 mL,2.5 mmol)到混合液中,搅拌条件下在暗处反应20 h。最后,加入TEOS (13.8 uL,0.062 mmol)并反应5h。再经15000 rpm高速离心,并用70%乙醇和去离子水洗涤。将制得的纳米粒子转移至表面皿,烘干后保存。

荧光硅纳米粒子的表面修饰:

将制得的SiNPs纳米粒子超声分散在5 mL,1 mM的乙酸中,加入50 mLAPTS和150 mL THPMP,在室温下摇床反应3 h。多余反应物离心去除,氨基修饰的SiNPs用去离子水洗三次后超声分散在包含58 mg 的 5 mL DMF中,过夜搅拌,然后15000 rpm离心洗涤并用DMF和去离子水各洗3次,则得到羧基修饰的SiNPs。干燥后2 mg羧基修饰的SiNPs溶解在包含MES (0.1 M),NHS ( 10 mM)以及EDC ( 10 mM)的混合液中,37℃条件下活化1.5 h,并用PBS 溶液离心洗涤3次。最终制得的表面羧基改性的SiNPs溶解在2 mL PBS中,加入链霉亲和素SA (100 uL,1 mg/mL)室温下摇床反应4h并保存于4℃环境下过夜。离心洗涤反应混合液除去过量的亲和素,SA-NPs溶解在 PBS溶液中4℃保存。

结论:

将荧光硅纳米粒子这一新型探针用来检测反向蛋白质微阵列芯片。通过Stober方法将罗丹明B分子通过共价结合的方式成功地被包覆在二氧化硅纳米粒子中,制备的纳米粒子具有很好的水溶性、成像稳定性以及生物兼容性,其粒子大小约为60 nm,荧光强度和单个罗丹明B分子相比提高了4000倍。对此荧光硅纳米粒子进一步进行了氨基、羧基及链霉亲和素修饰,成功制备了可特异性结合生物素修饰蛋白质的纳米荧光检测探针。


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以上来源于文献整理,如有侵权,请联系删除,RL2023.9。








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