一文分清IP、co-IP、ChIP、RIP、pull-down！
蛋白质是生物功能最直接的执行者，虽然一些蛋白质可以独立的完成他的使命，但是大部分的蛋白都是需要一些伴侣分子的协助一起完成任务或者形成复合物之后才能充分发挥他的功能。
了解蛋白质与蛋白质之间的相互作用，能够帮助我们更好的了解细胞的生命活性，揭示隐藏在表象下的调控机理。说到蛋白互作，就绕不开IP、co-IP、ChIP、RIP、pull-down这几个实验技术。他们之间既有联系又有区别，放在一起还真的有点傻傻分不清楚，今天就主要介绍一下这几个实验技术！
文末还有《实验Protocol大全》，有需要可自行领取！
一、免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）
免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）主要原理是根据抗原和抗体的特异性结合，利用抗体将靶标蛋白（即抗原）分离出来，只是为了检测某一种蛋白的表达情况。co-IP、ChIP、RIP等技术由IP演化而来，可以用来研究与蛋白结合的分子。
二、免疫共沉淀技术（co-Immunoprecipitation, co-IP）
免疫共沉淀技术（co-Immunoprecipitation, co-IP）是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法，通过抗体和已知蛋白结合，从而捕获整个已知蛋白复合物，进而研究复合物中与已知蛋白存在相互作用的蛋白。
IP和co-IP的区别在于检测的最终目标是直接与抗体结合的蛋白，还是间接与抗体结合的蛋白。
三、染色质免疫共沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）
染色质免疫共沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是用来研究蛋白质与DNA是否在体内存在相互作用，常用来检测转录因子结合位点。利用抗原抗体的特异性结合，将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来，能够真实地反映结合在DNA序列上的调控蛋白。
一般包括：细胞固定---染色质断裂---染色质免疫沉淀---交联反应的逆转---DNA的纯化及鉴定。可以用PCR或者高通量测序鉴定DNA与蛋白质的结合情况。
四、Pull-down实验
主要原理是利用带有标签的已知蛋白作为诱饵蛋白（最常用的是GST标签，即谷胱甘肽巯基转移酶，glutathione S-transferase），诱饵蛋白特异性结合谷胱甘肽亲和树脂，当目的蛋白溶液过柱时，将诱饵蛋白及其相互作用的蛋白复合物捕获。复合物洗脱后，通过蛋白凝胶电泳分析两种蛋白间的相互作用，或者筛选相应的目的蛋白。
这里补充一下：co-IP和pulldown区别是什么？
co-IP研究的是体内自然状态下的蛋白质互作，反应地是比较真实的蛋白质之间的相互作用，而pull down则是通过体外实验，无法得知体内真实的结合情况。
co-IP由于沉淀下来的是蛋白复合物，所以不能显示蛋白质之间的相互作用是直接还是间接的，而pull down可以确定目的蛋白和检测蛋白是否可以发生直接相互作用。
五、RNA结合蛋白免疫沉淀技术
RNA结合蛋白免疫沉淀技术（RNA Binding Protein ImmunoprecipitationAssay，RIP）主要是用来研究体内、RNA与蛋白结合情况，利用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，通过分离纯化，对结合在复合物上的RNA 进行RT-PCR验证或测序分析。
六、RNA pull down实验
顾名思义，是研究RNA与蛋白质相互作用的一种技术。利用生物素标记的RNA探针，通过与含有目的蛋白的溶液孵育，形成RNA-蛋白质复合物。
复合物可以特异性结合磁珠，从而与孵育液中的其他蛋白分离。复合物洗脱后，通过蛋白凝胶电泳实验，检测特定的RNA与蛋白的结合情况。
往期相关内容
《实验Protocol大全》，包含以下内容，有需要自取！
1）实验与Protocol-表型确认
2）实验与Protocol-分子机制
3）实验与Protocol-细胞交互
4）实验与Protocol-直接作用机制
5）中文版69个实验protocol大全--DNA技术+PCR技术+RNA技术+蛋白质技术+感受态技术+细胞技术
6）1502页的实验指南
7）14类实验课程+PCR
8）7大热门实验技术实验方案大全
9）分子生物学实验技术大全
10）免费实验技术查询：60,000种实验protocols和methods
11）实验技术及原理指南
