马齿苋多糖偶联顺铂复合物/黄连素偶联顺铂化合物/载顺铂mPEg-PGA纳米微球制备方法

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黄连素偶联顺铂化合物制备方法:

以A549/DDP细胞为研究对象,分别加入12 μg/mL的顺铂,浓度为20 μmol/L,40 μmol/L,80 μmol/L的黄连素+12 μg/mL的顺铂,设置空白对照孔(PBS孔),分别用药物干预24 h,48 h,72 h,采用MTT法检测细胞增殖活性;各组用药干预48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot 法检测Caspase-3,Caspase-9,Bax,Bcl-2的蛋白表达情况,Real-time PCR法检测Caspase-3,Caspase-9,Bax,Bcl-2的mRNA表达水平.不同浓度的黄连素联合顺铂使促凋亡相关基因Caspase-3,Caspase-9,Bax在蛋白和mRNA水平表达上调(P<0.05)。

载顺铂mPEg-PGA纳米微球的制备：
以甲氧基聚乙二醇(mPEG 5000)为原料,采用Gabriel法制得甲氧基-聚乙二醇胺(mPEG-NH2),用Fuchs-Farthing光气法制得L-谷氨酸5-苄酯N-羧基环内酸酐(L-Glu (Z)-NCA),再以mPEG-NH2为大分子引发剂引发NCA开环聚合,经酸解脱去了聚合物侧链的苄氧羰基保护基,合成了两亲嵌段共聚物mPEG-PGA.产物用FT-IR,1HNMR,GPC,CMC等进行了表征.(2)制备了mPEG-PGA聚合物纳米颗粒,载顺铂mPEG-PGA纳米颗粒以及载顺铂mPEG-PGA-BSA偶联物,用透射式电子显微镜(TEM)和广角激光光散射仪(DLS)等方法对纳米颗粒的粒径大小及形态进行了研究.结果表明所制备的聚合物纳米颗粒绝大部分具有核/壳结构,TEM测得的粒径尺寸为25-35 nin,DLS测得的粒径尺寸为90-120 nm.

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