ER-Tracker Green,内质网绿色荧光探针(活细胞)

ER-Tracker Green,内质网绿色荧光探针(活细胞)（BODIPY FL 格列本脲）探针是一种具有细胞通透性的活细胞染色剂，对内质网 (ER) 具有高度选择性染料，不像传统的DiOC6(3)，该染色剂由发绿色荧光的 BODIPY™ FL 染料和格列本脲组成。格列本脲（聚糖）可与内质网上的 ATP 敏感性 K+ 通道的硫化脲受体结合；格列本脲活性可能影响内质网功能。部分专用细胞类型中的硫化尿素受体不定可变表达可能引起非 ER 标记。该系列探针几乎不对线粒体着色，且在较低浓度即可实现对内质网的染色，且对细胞几乎无毒性。使用以下提供的优化步骤对活细胞染色后用醛固定，可以部分保留活细胞的染色特征。 荧光波长：Excitation: 504 nm, Emission: 511 nm。

图1：ER-Tracker Green结构式

ER-Tracker Green（BODIPY FL 格列本脲）使用方法

本实验方案经牛肺动脉内皮细胞优化，且已被其他常规细胞系验证。但不同的细胞类型其最佳使用条件不同，还需用户根据该方案进行进一步优化。
1. 准备试剂
使用前将ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide)回温至室温，并简短离心使该DMSO溶液至管底。
2.  细胞样品处理及染色
2.1 将1mM ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide)储存液按照实验要求稀释至工作浓度，推荐工作浓度为～1µM。建议在不影响实验结果的前提下尽量使用较低浓度探针，以避免由于浓度过高染色导致的假象。
注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡盐溶液（HBSS/Ca/Mg）稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。
2.2 染色过程
对于贴壁细胞，吸除培养皿中培养基，用HBSS清洗细胞，加入预热的染料工作液于37℃孵育细胞15-30min。吸除染色液，加入不含探针的新鲜培养液，并在荧光显微镜下观察细胞。
细胞如需固定，请参考以下步骤。
3．细胞固定
3.1 固定细胞：用4%甲醛于37℃固定细胞2min。
注：已染色细胞用醛固定后，仅部分ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide)留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。
3.2 清洗观察细胞：细胞固定后，可用合适缓冲液进行清洗，每次5min，共2次。清洗后可对细胞进行后续封片、镜检或进一步染色。
注：不建议对细胞进行透化处理，因为经Triton X-100透化后，无信号保留。

图2：用 ER-Tracker Green 和 MitoTracker Red CMXRos 标记的活牛肺动脉内皮细胞。