【高考生物复习】基因工程：表达载体构建、限制酶 |重难点专题

我是视频里的红字菌，这个题确实给我留下了很深的印象，所以呢，做一个总结，希望能帮助到大家！

山东题的总结：

y基因的启动子+荧光蛋白

需要用到的是基因y的启动子，把启动子的那部分剪切下来，再接上荧光蛋白的基因

因为，y基因的表达没有明显的特征，并不知道它是否表达了，所以，这个时候就把y基因换成荧光蛋白基因

【这与后面想知道vgt基因是否表达的操作是一样的】

即vgt的启动子+ GFP绿色荧光蛋白

题目的难点：

①连接顺序的反正

上面一段，从左往右，经过y基因，再到终止子

下面一段，从右往左（中间空白部分必定存在着启动子）经过荧光蛋白基因，再到终止子

故，连接的时候需要反过来

②用不同的酶切出相同的粘性末端，既要意识到同尾酶

限制酶的选择：

a.排除E酶，因为荧光蛋白基因上有E酶

b.排除M酶X酶，因为破坏了f1～f7的调控序列的完整性

下面一段，空白部分的三个酶切位点所对应的酶，都不可以用，便要寻找同尾酶！！！！

X酶与S酶，M酶与E酶

③引入酶切位点，即：在扩增目的片段的时候，在引物末端加上酶切位点序列（就是增加序列）

首先要注意题干！！！

“需在引物末端增加限制酶识别序列”！！！

由此可知，需要增加序列

题目所问的是， F1～f7与R末端增加的序列所对应的限制酶，重点还是限制酶的选择

不过，需要提一嘴

添加序列，是为了调控序列及启动子的那片段切割和转移到载体上，与荧光蛋白基因结合

a.因为，调控序列及启动子上，只有两个酶切位点，而他们所对应的酶是不能用的，故只能增加序列

b.上面一段，增加序列后，在用同尾酶 M酶和E酶切下来

下面一段，则需要用M酶和X酶

虽然，上下两段的末端用了两种不同的酶，但是他们切割出了相同的黏性末端！！所以，可以用连接酶连接起来！！

这就是同尾酶的作用