动物实验AAV感染指南——肺部篇

上期我们介绍了感染肾脏的常见注射方法。本期主要介绍感染肺的常用注射方法：鼻内滴注、气管插管注射和气管内注射，其中鼻内滴注经Santry等[1]研究人员改良后感染效果更佳。本次将详细介绍这几种注射方法，文字描述末尾有附上视频教程链接哦，小伙伴可直接将网址复制到浏览器中观看学习~

 

图 AAV感染小鼠肺部的注射方法

a.鼻内滴注 b.改良鼻内滴注 c.气管插管注射 d.气管内注射[1]

 

改良的鼻内滴注操作步骤[1]

（1）小鼠经鼻吸入2.5%异氟醚和O2（1L/min）麻醉，切勿过度麻醉以保持小鼠稳定的呼吸频率；

（2）右手捏住小鼠后颈，左手轻轻捏闭小鼠嘴巴，防止其口部呼吸；

（3）在鼻腔内缓缓滴入40μL AAV，使其全部被小鼠吸入；

（4）小鼠保持上述姿势30s，使AAV分布至下呼吸道；

（5）小鼠放回笼中恢复约10min，重复一次上述操作（共注射80μL AAV）。

 

视频教程：

https://www.jove.com/cn/v/10215/compound-administration-iii

 

气管插管操作步骤[1-2]

（1）小鼠经鼻吸入2.5%异氟醚和O2（1L/min）麻醉；

（2）使小鼠仰卧，并将其前腿粘在手术板上，上颌切牙用橡皮筋固定；

（3）将高强度光纤柔性照明器放置在距胸骨腹侧1cm的位置，光纤通过气管照射，便于区分食管腔和气管腔；

（4）使用锯齿状钝鼻弯（20°角）不锈钢陡峭钳将小鼠舌头向外拉伸至口腔侧面，以便观察会厌和喉部，整个手术过程舌头保持这个位置；

（5）将导管插入气管至气管分叉前的位置；

（6）使用注射器通过导管注射40-80μL AAV；

注：在吸取40-80μL AAV之前先吸取约100μL的空气，防止AAV丢失并促进其进入肺部深处；

（7）小鼠保持该姿势5min，以便AAV分布至下呼吸道；

（8）把导管移出，将小鼠轻轻从工作台拿下，并将头部和胸部用折叠的纸巾小幅度垫高，以保证小鼠顺畅的呼吸；

（9）将小鼠放回笼中，至小鼠完全清醒。

 

视频教程：

https://www.jove.com/cn/v/52261/intubation-mediated-intratracheal-imit-instillation-noninvasive-lung

 

气管内注射操作步骤[3]

（1）小鼠经鼻吸入2.5%异氟醚和O2（1L/min）麻醉；

（2）使小鼠仰卧，并将其前腿粘在手术板上，颈部剃毛并使用聚维酮碘消毒手术区域；

（3）用手术剪刀在手术区域做一个5-7mm的小切口；

（4）一只手使用弯曲钳固定小鼠气管，另一只手握住注射器，使注射器针头斜面朝上，与气管成45°角；

（5）将40-80μL AAV缓慢注入气管，全部注射完毕等待5s缓慢拔出针头；

（6）缝合伤口，将小鼠放回笼中，至小鼠完全清醒。

 

视频教程：

https://www.jove.com/cn/v/1941/direct-tracheal-instillation-of-solutes-into-mouse-lung

 

以上就是感染肺部常用的注射方法，其中鼻内滴注操作简单，创伤小，但无法感染肺叶远端，气管插管注射和气管内注射可感染肺叶远端，但操作难度大，小伙伴可根据实验目的选择合适的注射方法。AAV5对肺部的亲和性较高，AAV6和AAV9也是常用于肺部感染的血清型，另外汉恒生物还可提供肺上皮细胞特异性启动子SP-C（SFTPC）用于目的基因在靶细胞特异性表达。更多关于肺部感染的问题欢迎咨询汉恒生物！

 

 

参考文献

[1] Santry L A , Ingrao J C , Yu D L ,et al.AAV vector distribution in the mouse respiratory tract following four different methods of administration[J].Bmc Biotechnology, 2017, 17(1):43.

[2] Sandhya D,Kelvin M,Sucie H C, et al. A simple method of mouse lung intubation.[J]. Journal of visualized experiments : JoVE,2013(73).

[3] Laura P , Lieshout V , Jakob M ,et al.AAV-Mediated Gene Delivery to the Lung.[J].Methods in molecular biology (Clifton, N.J.), 2019.