试用!特超敏ECL化学发光试剂盒
产品名称:BeyoECL Star (特超敏ECL化学发光试剂盒)
供应商:上海生物网
货号:AD000000040
规格:20ml
特超敏ECL化学发光试剂盒是一种用于检测蛋白质的化学发光试剂盒。ECL的全称是Enhanced Chemiluminescence,即增强化学发光,是一种常用的蛋白质检测方法。
特超敏ECL化学发光试剂盒使用特定的酶(通常是辣根过氧化物酶,HRP)催化底物产生化学发光反应。当该底物与HRP在存在氢过氧化物的条件下反应时,会产生激发态的酶底物复合物,进而释放出能量并发出光。该光可以通过摄像机、光电二极管或荧光成像系统等设备进行检测和定量。
特超敏ECL化学发光试剂盒具有以下特点:
1. 高灵敏度:能够检测低至femtogram级别的蛋白质,具有非常高的灵敏度。
2. 宽动态范围:能够检测广泛浓度范围内的蛋白质,适用于不同浓度的样品。
3. 高稳定性:试剂盒中的成分经过优化,具有较高的稳定性,能够保持长久的发光信号。
4. 易于操作:试剂盒提供了简单易行的操作步骤,可以快速进行实验。
5. 高分辨率:能够提供清晰、高分辨率的发光信号,有助于准确测量和定量分析。
eyoECL Star和BeyoECL Plus的检测效果对比图如下。Western检测过程中仅发光试剂不同,其余完全相同。
特超敏ECL化学发光试剂盒广泛应用于蛋白质分析、免疫印迹、酶联免疫吸附实验(ELISA)等生物学实验中。它可以用于检测和定量分析蛋白质样品中感兴趣的目标分子,提供了一种敏感、快速和可靠的蛋白质检测方法。
使用特超敏ECL化学发光试剂盒进行蛋白质检测时,可以按照以下步骤进行操作:
1. 准备样品:准备待检测的蛋白质样品,可以是细胞提取物、纯化的蛋白质或其他含有目标蛋白质的样品。
2. 制备检测膜:将样品进行电泳分离,然后转移到蛋白质检测膜上(例如聚丙烯酰胺凝胶膜、聚酰胺膜等)。
3. 阻断:将膜置于阻断缓冲液(例如含有牛血清蛋白、非脂干奶粉等)中,在室温下进行阻断步骤,以减少非特异性结合。
4. 主抗体孵育:将特异性的一抗主抗体加入含有适当浓度的抗体结合缓冲液中,然后将膜与主抗体溶液一起孵育,以允许主抗体与目标蛋白质结合。
5. 洗涤:将孵育后的膜进行洗涤,以去除未结合的主抗体和其他非特异性结合物。
6. 二抗孵育:将与HRP(辣根过氧化物酶)偶联的二抗加入含有适当浓度的抗体结合缓冲液中,然后将膜与二抗溶液一起孵育,以允许二抗与主抗体结合。
7. 洗涤:将孵育后的膜进行洗涤,以去除未结合的二抗和其他非特异性结合物。
8. 发光:将特超敏ECL化学发光试剂盒中的试剂按照说明书的指导加入膜上,并确保试剂均匀覆盖整个膜表面。注射试剂之后,化学发光反应会在膜上产生光信号。
9. 检测和记录:通过使用光学成像设备(如摄像机、光电二极管等)记录发光信号,可以使用相应的软件定量分析蛋白质的相对丰度。
BeyoECL Star检测不同剂量HRP-IgG,20分钟后发光效果几乎不变,120分钟后发光效果仍然良好,如下图所示。
需要注意以下几点:
- 实验操作:在进行实验前,要确保操作环境和仪器器材的洁净,以避免污染和干扰发光信号。
- 抗体选择:选择特异性的主抗体和二抗,以确保准确的检测结果。根据目标蛋白质的特异性,选择合适的抗体。
- 洗涤步骤:洗涤步骤的次数和缓冲液的组成可以根据实验的需要进行优化,以确保充分去除非特异性结合物。
- 发光时间:发光时间可以根据发光信号的强度和持续时间进行优化,以获得最佳的检测结果。过长或过短的发光时间可能会影响结果的准确性。
总之,在使用特超敏ECL化学发光试剂盒进行蛋白质检测时,要严格按照操作步骤进行实验,注意样品的处理和抗体的选择,以及洗涤和发光的条件优化,以获得准确可靠的检测结果。
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