TTC 染色实验

通过 TTC 染色观察梗死病变及梗死体积。
材料与仪器
2,3,5-三苯基氯化四氮唑溶液；冠状切片脑槽，刀片；戊巴比妥钠；注射器；取脑手术器械。
步骤
1.MCAO 诱导一定时间后（根据实验者需求），麻醉小鼠，断颈取出大脑，将脑放入脑槽中。放入 -80°C 冰箱 1-2 min，将大脑稍冻硬一点。
2.将大脑冠状切片为四个 2mm 切片，注意不要损坏脑片完整性。
3.将脑片放入 2% TTC 溶液（PBS 溶解）中，避光放入 37°C 恒温箱 15min，中途可摇晃脑片使得染色均匀。
4.将染色完毕的脑片放入 4% 福尔马林溶液，固定保存用于后续定量检测梗死区域。
注意事项
1.TTC 染色应全程避光。
2.动物取材不需要灌流取材，直接取出大脑即可。
3.在做脑槽切片时，提前将脑子冻一下更好切，不易损坏。

常见问题
1.切脑片的时候大脑容易损坏怎么办？
答：脑槽中要保证无水，大脑取出要迅速放进脑槽，并快速放入 -80°C 冰箱 1-2min，在取出脑片的时候，要两个刀片一起抬出较容易将脑片从脑槽中取出。
2.TTC 染色怎么没有白色梗死区域？
答：考虑 MCAO 造模是否成功，是否 37°C 染色 15min，并且整个染色过程一定要避光。