WB常见问题分析，教你做出漂亮的Western Blot数据

你的Western Blot结果是否出现过非特异性条带？条带变窄变宽了？条带哭了条带笑了？信号太弱了？等情况，所以现在需要提升一下你的Western Blot结果的颜值了！

如何使电泳条带漂亮些？

电泳注意事项

●为减少小蛋白条带的扩散，上样后应尽快开始电泳 

●如用预染Marker，当要分辨的蛋白到达最佳分辨区——分离胶的2/3处 ，结束电泳

●电泳用恒压模式能保持蛋白质恒定的电泳迁移率，而电压先低后高可使样品更好的进入凝胶。实际电压可根据时间安排调节，电压高时电泳发热大，电压低于50V时小蛋白容易弥散，凝胶分辨率会下降。

影响跑胶的质量，有以下因素：

● 胶的均匀度，胶越均匀，条带越窄，分离越均匀。  倒胶之前，一定要充分混匀，玻璃板一定要干净，水或饱和正丁醇隔离时，一定要比较轻地加上去，避免稀释下层的分离胶，使胶不均匀。

● 聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝胶的分辨率。建议做法：待凝胶在室温凝固后，可在室温下放置一段时间使用。

● 电压，小的电压会使胶的分子筛效应得到充分发挥。  电压越小，条带越漂亮，浓缩胶80v，分离胶100v就能跑得很好。

● 样品，在加样前离心，增加一些增溶辅助试剂如尿素，可以克服由于样品溶解不佳引起的纹理和拖尾现象 。

● 减少上样量可以避免由于加样量太多引起蛋白带过宽或与邻近泳道的蛋白带相连。

WB常见问题分析

高背景

信号弱或无信号

非特异性条带

其他

● 条带出现微笑的上扬形状，表示胶没有混匀或者电泳时散热不均匀，电压过高，缓冲液浓度过高。

● 垂直条纹，表示上样量过多或者样品有沉淀。

● 条带变窄，说明盐浓度过高，需脱盐; 凝胶不均匀，梳子没拔好。

● 条带变宽，说明电泳前样品扩散，故加样操作要快。

● 两个条带，说明蛋白没有完全还原，或又重新氧化，需配置新鲜缓冲液。